CONDICIONES ÓPTIMAS DE TEMPERATURA Y PH PARA ENZIMAS MICOLÍTICAS SECRETADAS POR TRICHODERMA KONINGIOPSIS POS7

AMERIO, NS; BARENGO, MP; BICH, GA; ZAPATA, PD; VILLALBA, LL; CASTRILLO, ML

Posadas

Jornada; 1ras Jornadas Institucionales del InBioMis. 10 años Construyendo Biotecnología; 2022

Las enzimas hidrolíticas como ser quitinasas, β-1,3 glucanasas y proteasas, se hansugerido que son esenciales para la acción micoparásita de diversas especies deTrichoderma contra hongos fitopatógenos. El objetivo de este trabajo fue determinarlas condiciones óptimas de temperatura y pH de reacción de quitinasas,β-1,3-glucanasas y proteasas, en un formulado enzimáticos a base de Trichodermakoningiopsis POS7, potencial biocontrolador de hongos fitopatógenos.Se utilizó un diseño de optimización de un factor a la vez, utilizando como pHiniciales los indicados en los protocolos estandarizados para estas enzimas:método del ácido dinitrosalicílico para la cuantificación de quitinasas yβ-1,3-glucanasas; y método de la azocaseína, para la cuantificación de proteasas. Elefecto de la temperatura sobre la actividad de las quitinasas se evaluó incubando lasmezclas de reacción a 25, 37, 45, 55 y 65 °C, en un pH 4.8; para las β-1,3-glucanasaslas mezclas de reacción se incubaron a 30, 40, 50, 60 y 70 °C, en un pH 5; y para lasproteasas se evaluó incubando las mezclas de reacción a 25, 37, 45, 55, 65 °C, en unpH 7.4. El efecto del pH se determinó incubando las mezclas de reacción a latemperatura óptima obtenida, utilizando diferentes buffers para variar el pH de lareacción; para quitinasas se ensayaron pHs 3, 4, 4.8, 6 y 7; para las β-1,3-glucanasasse ensayaron pHs 3, 4, 5, 6 y 7; y para proteasas se ensayaron pHs 5, 6, 7.4, 8 y 9. Lasdemás condiciones de reacción se mantuvieron constantes y todos los ensayos serealizaron por duplicado. Los datos se analizaron usando el software StatgraphicsCenturion XVI.I. Se utilizó la prueba de Tukey para evaluar y seleccionar las variablesque tuvieran un efecto significativo sobre la actividad enzimática. La actividadenzimática se expresó en U/L. Se realizó un análisis de varianza (ANOVA) y unaprueba de diferencia entre medias, con un nivel de confianza del 95,0 %.En cuanto a la actividad quitinasa, la máxima actividad (22,217 U/L) se observó a 45°C con diferencia estadísticamente significativa (p < 0,05) con respecto a las demástemperaturas, y en relación a los pHs, 3, 4 y 4.8 no presentaron diferenciasestadísticamente significativas (p > 0,05) entre ellos. Para la actividadβ-1,3-glucanasa, la máxima actividad (1091,68 U/L) se obtuvo a 60 °C y pH 5, condiferencia significativa (p < 0,05) con respecto a las demás condiciones. Para la actividad proteasa, la máxima actividad (897,33 U/L) se observó a 45 °C y pH 7.4con diferencia estadísticamente significativa (p < 0,05) con respecto a las demáscondiciones.Estos resultados permitieron establecer las condiciones óptimas de temperatura ypH de las enzimas micolíticas presentes en el formulado enzimático optimizado deT. koningiopsis POS7. La presente caracterización bioquímica representa un factorimportante para la aplicación eficiente de estas enzimas en el control biológico defitopatógenos.