Secreción de enzimas micolíticas en Trichoderma koningiopsis inducida por paredes celulares fúngicas

AMERIO, NS; BARENGO, MP; BICH, GA; ZAPATA, PD; CASTRILLO, ML; VILLALBA, LL

Posadas - Modalidad virtual

Simposio; SAPROBIO 2021; 2021

Las enzimas micolíticas como ser quitinasas, β-1,3 glucanasas y proteasas, son esenciales para la acción micoparasítica de diversas especies de Trichoderma contra hongos fitopatógenos. En el presente trabajo se propuso potenciar la actividad enzimática micolítica de la cepa Trichoderma koningiopsis POS7, previamente seleccionada por nuestro grupo de trabajo por presentar elevada actividad biocontroladora. Se realizó un diseño experimental factorial, utilizando medio de cultivo líquido con diferentes concentraciones de paredes celulares tratadas de Fusarium sp. como fuente de carbono, el cual es un factor determinante en la secreción enzimática. Para el tratamiento de las paredes fúngicas, se inocularon tacos de micelio de Fusarium sp. en medio líquido compuesto por: glucosa 0,5 % y extracto de malta al 1,27 % como fuente de carbono, y Mandels como fuente de nitrógeno. Se incubaron 14 días a 28 ± 1°C con luz continua, con el fin de obtener gran cantidad de micelio. Éste se recogió mediante filtración a través de papel de filtro Whatman No. 1, se lavó con agua destilada y se dejó reposar en ClNa 0,85 % durante 2 horas, se hirvió en SDS 2 % durante 5 minutos y centrifugó (4500 x g) durante 10 minutos. El micelio recolectado se lavó con cloroformo:metanol (1:1) y acetona, se dejó secar a temperatura ambiente por 24 horas, se trituró en un mortero y se almacenó en freezer. Las concentraciones de paredes celulares tratadas de Fusarium sp. ensayadas fueron: 0,5 %; 1 %; 2 %, 3 %, 5 %, 7 % y 9 %. Como complejo nitrogenado se utilizó extracto de levadura 0,25 % adicionado con KH2PO4 (2g/L), CaCl2.2H2O (0,4 g/L), MgSO4.4H2O (0,3 g/L), FeSO4.7H2O(0,005 g/L) y MnSO4.4H2O (0.002 g/L). Cada medio se realizó por duplicado en Erlenmeyer de 250 ml con 60 ml de medio de cultivo. Se esterilizaron en autoclave durante 15 min a 121 °C y 1 atm de presión superior a la normal. El inóculo consistió en 2,5 mL de una suspensión (1-2 x 10 7 esporas/mL) de T. koningiopsis POS7. El ensayo se llevó a cabo en agitación continua a 100 rpm a 28 ± 1 ºC por 14 días. Cada 2 días se tomó una alícuota para realizar las determinaciones enzimáticas cuantitativas. Los ensayos que contenían 7 % de paredes celulares tratadas de Fusarium sp. presentaron actividades máximas para las tres enzimas. En relación al tiempo de incubación, para quitinasas se obtuvo el valor máximo el día 10 (111,47 U/L), para β-1,3 glucanasas y proteasas el valor máximo se observó el día 12 (2671,21 U/L y 700,26 U/L, respectivamente). A partir de dichos resultados se logró seleccionar la concentración de 7 % de paredes celulares tratadas de Fusarium sp., como la fuente de carbono que mostró efectos estadísticamente significativos y positivos sobre la secreción enzimática de quitinasas, β-1,3 glucanasas y proteasas de T. koningiopsis POS7. Los resultados obtenidos permitieron optimizar la secreción de enzimas micolíticas bajo condiciones controladas en fermentación líquida por T. koningiopsis POS7, lo cual continua potenciando la utilización de enzimas fúngicas de Trichoderma en control biológico.