Estandarización del método cuantitativo de azocaseína para determinar la actividad proteolítica en sobrenadantes fúngicos de Escovopsis y Trichoderma

BARENGO, MP; AMERIO, NS; BICH, GA; CASTRILLO, ML; ZAPATA, PD

Biotecnologia Aplicada

Elfos Scientiae

Lugar: Cubanacán, Playa; Año: 2020 vol. 37 p. 2201 - 2207

Los hongos micoparásitos son capaces de hidrolizar las paredes celulares de su hospedador mediante la secreción de enzimas hidrolíticas, como las proteasas. La metodología basada en el uso del sustrato azocaseína para cuantificar la actividad proteolítica es una de las más robustas y reproducibles. Sin embargo en la literatura se presentan múltiples modificaciones de acuerdo a su aplicabilidad y el tipo de microorganismo. Por lo tanto, el objetivo del presente trabajo fue establecer las condiciones de reacción óptimas, al emplear la enzima pura papaína paracuantificar la actividad proteolítica de sobrenadantes enzimáticos fúngicos de Trichoderma y Escovopsis. Se ensayó el efecto del tiempo, el pH y la temperatura de reacción sobre la actividad enzimática a distintas concentraciones de papaína. Para medir la actividad se utilizó el sustrato cromogénico azocaseína. Los sobrenadantes enzimáticos se obtuvieron mediante fermentación liquida de dos micoparásitos fúngicos: Escovopsis HEP25 y Trichoderma POS7. De acuerdo a los parámetros evaluados, se observaron actividades proteolíticas significativas a 50 min de reacción, 37 °C y pH 7,4. La actividad se expresó en términos de unidades equivalentes a la actividad de una masa determinada de papaína (1 unidad = 1 mg de papaína). Para la cepa Trichoderma POS7 se obtuvo una actividad de 54.3 ± 2.8 U/L, y para la cepa Escovopsis HEP25 de 2 ± 0.5 U/L. Se determinó que la metodología ajustada y el cálculo de actividad enzimática fueron apropiados para analizar las muestras de sobrenadantes crudos. Particularmente, para el género Escovopsis se reporta por primera vez la determinación de actividad proteolítica.