Avances en la prueba de un test molecular simplificado para la pesquisa neonatal del Chagas congénito

STOLOWICZ FG; LAROCCA L; TERRONES CD; DIMA E; SMITHIUS F; MACALLINI G; ARANDA C; VOJNOV AA; ONETO A; CARRILLO C

CABA

Jornada; 52° Jornadas Científicas Anuales del Hospital ?Dr. Carlos G. Durand?.; 2016

Hospital de Agudos Dr. Carlos G. Durand

INTRODUCCIÓN: El Chagas es una endemia causada por el Trypanosoma cruzi. La transmisión vertical, cuya tasa se describe entre el 1% y el 15% según distintos trabajos, es la única vía que no puede prevenirse. En Argentina, se estima que nacen anualmente ~1.200 niños/as con Chagas congénito. El diagnóstico precoz asegura el éxito del tratamiento.OBJETIVO: Se ha desarrollado un test para la detección del Chagas congénito, basado en la tecnología de amplificación molecular isotérmica (AMI), que se adapta a las prácticas de laboratorio en recién nacidos (RN). En este trabajo se probó el test con muestras de pesquisa, iniciando el estudio clínico de sensibilidad, especificidad y variables operativas.MATERIALES Y MÉTODOS: se utilizaron muestras remanentes de la pesquisa neonatal (gota seca en papel), en formato de círculos de 5mm de diámetro, de dos poblaciones: *GRUPO A: RN cuyas madres están infectadas para Chagas; *GRUPO B: RN cuyas madres no están infectadas. Se utilizaron controles negativos (sangre certificada negativa y papel sin siembra) y un control positivo (sangre artificialmente inoculada con el parásito). La reacción AMI se realizó en 4 pasos: i- toma de muestra; ii- mezcla de muestra y reactivos; iii- incubación a 65ºC- 40min; iv- revelado por cromatografía en ?lateral flow dipsticks? (LFD) (tiras tipo test doméstico de embarazo). Los resultados se compararon con los obtenidos por los métodos de referencia (M.Ref.): Parasitemia a 0 - 3 meses y serología luego de los 10 meses de edad.RESULTADOS: Se realizaron 134 reacciones de AMI, 35 de las cuales pudieron compararse con resultados obtenidos por M.Ref. MUESTRAS DEL GRUPO A: Ensayo I - 10 muestras: encontramos 60% de concordancia entre M.Ref. y AMI (estos positivos), comprobando que existe contaminación cruzada entre tarjetas cuando están físicamente en contacto. Ensayo II - 10 muestras con resultados sólo de parasitemia como M.Ref.: AMI mostró una concordancia del 70%; Ensayo III - 15 muestras con resultados de serología: concordancia de AMI del 86.7%. MUESTRAS DEL GRUPO B: Ensayo IV - 45 reacciones: se obtuvo con AMI un resultado positivo y uno indeterminado, indicando una concordancia del 95,5%.CONCLUSIONES: El método AMI, además de ser extremadamente sencillo de aplicar, presentó una sensibilidad notablemente mayor a la parasitemia y similar- o levemente mayor- a la serología. Puesto que el número de muestras ensayadas es todavía pequeño no podemos descartar que haya casos de falsos positivos de AMI ni obtener una tabla de contingencia con valor estadístico. Hasta aquí, AMI parece resultar un método de detección con alta sensibilidad, simple y temprano (se realiza al momento de nacer) para la pesquisa de Chagas congénito. Puesto que la trazabilidad de las muestras resultó operativamente difícil, se planea continuar con el estudio, para alcanzar valores estadísticos.