Evidencias bioquímicas de enzimas involucradas en el metabolismo de arginina en Phytomonas Jma

FRACCAROLI L; MARCORA MS; BALCAZAR DE; CARRILLO C

Buenos Aires

Congreso; XXVII Reunión Anual, Sociedad Argentina de Protozoología (SAP); 2015

SAP

Phytomonas Jma es un parásito tripanosomátido que infecta gran variedad de plantas. Eneste trabajo avanzamos en el estudio de su metabolismo indagando en la presencia de lasenzimas que utilizan Arginina como sustrato, enfocándonos en aquellas relacionadas alciclo de arginina - ornitina:i- Arginina decarboxilasa (ADC), que produce agmatina y CO2: en ensayos de biosíntesis (invivo e in vitro) utilizando arginina marcada, se liberó CO2 pero no se observó síntesis deagmatina; los niveles de CO2 no se modificaron en presencia de DFMA, inhibidorespecífico de ADC. Estas evidencias sugieren la ausencia de ADC en Phytomonas Jma.Paralelamente, mediante análisis in silico no se encontraron secuencias putativas de ADCii- Óxido nítrico sintasa (NOS), que cataliza la formación de citrulina y NO: si bien no sellegó a detectar citrulina sintetizada a partir de arginina marcada (por técnicaselectroforéticas), detectamos nitritos (por ensayo de Griess) en sobrenadantes dePhytomonas Jma en presencia de distintas concentraciones de arginina. Esto podríasugerir actividad de NOS, también sugerido por el hallazgo, mediante análisisbioinformático, de una secuencia con un 42% de identidad con la NOS de Leishmaniainfantum.iii- Arginasa, que produce ornitina y urea: la detección de ornitina y, consecuentementeputrescina, a partir de arginina marcada así como la disminución de la producción de ureay CO2 al incubar con el inhibidor NOHA, sugirieren la presencia de arginasa. Comohistóricamente se ha propuesto la ausencia de arginasa como marcador de especie dePhytomonas spp, este resultado puede resultar controversial. Sin embargo, a través deanálisis bioinformáticos hallamos una secuencia putativa de arginasa, la cual será clonaday caracterizada funcionalmente como siguiente paso en este trabajo.En conclusión, estos estudios contribuyen al conocimiento de la biología de estetripanosomátido con impacto agrícola en economías regionales.