CHAGAS: A viejos desafíos, nuevas tecnologías

STOLOWICZ FG; LAROCCA L; VOJNOV AA; CARRILLO C

San Miguel de Tucumán

Simposio; De la Biología a la Biotecnología". 3ra Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de Argentina; 2015

SAB

Más de 8 millones de personas en el mundo están infectadas con Trypanosoma cruzi, agente etiológico del Chagas. EnArgentina se estiman 1500 nacimientos con Chagas congénito al año pero se notifican ~300 casos a causa de laslimitaciones del diagnóstico neonatal.OBJETIVO: Desarrollar un test de diagnóstico para Chagas congénito por amplificación molecular isotérmica (?AMI?)simplificado, útil en cualquier condición de atención neonatal.MATERIALES Y MÉTODO: se utilizó sangre control e inoculada artificialmente con T. cruzi en dilución seriada. Seensayaron reacciones AMI, con sangre líquida y en gota seca en papel. Se determinaron condiciones óptimas de reacción;sensibilidad y especificidad -comparativamente con Real time Polymerase chain reaction (RT-PCR)- ; revelado porelectroforesis (método analítico) y cromatografía en ?lateral flow dipstick? (LFD) (método a campo); se desafiaron muestrasclínicas certificadas.RESULTADOS: La reacción AMI fue óptima a 65°C- 60min. La sensibilidad de detección fue de ~1parásito/muestra (similara RT-PCR), tanto revelando por electroforesis como por LFD, manteniéndose en ensayos simplificados dispensados enmezclas de reacción. Todo ensayo con ADN heterólogo (humano, levadura, T. brucei y Leishmania mexicana, etc.) resultónegativo para AMI y RT-PCR. Las primeras muestras clínicas ensayadas dieron resultados concordantes con lascertificaciones.CONCLUSIONES: La adaptación de AMI a condiciones simplificadas, tanto en muestras artificialmente inoculadas comoclínicas, presenta extrema especificidad y sensibilidad; esto nos alienta a avanzar en el desarrollo de un test apto paraaplicar en cualquier condición de atención sanitaria neonatal.