Immunochemical and computational characterization of the major soybean allergen Gly m Bd 30K

CANDREVA, ÁNGELA; CURCIARELLO, RENATA; GONZÁLEZ, VIRGINIA; PARISI, GUSTAVO; PETRUCCELLI, SILVANA; DOCENA, GUILLERMO

Mar del Plata

Congreso; 57º Reunión Anual SAI. 54º Reunión Anual SAIC; 2009

Sociedad Argentina de Inmunología

En las últimas décadas nuevos y diversos productos alimenticios de soja fueron desarrollados, aún así uno de los mayores problemas para la expansión de los mismos es la presencia de proteínas alérgicas en soja. Gly m Bd 30K/P34 proteína de reserva de la semilla es reconocida como el mayor alérgeno proteico de soja. El objetivo de este trabajo fue clonar y expresar en bacterias a P34 con el fin de poder caracterizarla para entender sus propiedades moleculares e inmunoquímicas. A partir de una biblioteca de cDNA de semillas inmaduras de soja se amplificó por PCR El gen codificante para P34. El gen fue clonado empleando el sistema Gateway (Invitrogen), cuyos vectores permiten la fusión a la maltose-binding protein (MBP) y a un Tag de histidinas, para facilitar la purificación de la proteína recombinante. El plásmido obtenido fue introducido en diferentes cepas de E. coli, optimizándose las condiciones de inducción y purificación. La proteína recombinante P34 obtenida fue analizada por Inmunoblots con varios sueros: suero policlonal de cabra anti-leche vacuna (LV), anticuerpos monoclonales anti-caseínas de LV, y sueros de pacientes alérgicos a LV para evaluar posible reactividad cruzada entre P34 y las proteínas de LV. También se analizó la proteína recombinante mediante ELISA indirecto IgE específico para analizar la reactividad contra sueros de pacientes alérgicos a soja de la población argentina. Se utilizaron además diversas herramientas bioinformáticas para obtener un modelo de la estructura tridimensional de la proteína y así poder detectar potenciales epitopes IgE inmunodominantes utilizando información disponible en las bases de datos de alérgenos. Se logró obtener un buen sistema para la obtención de la proteína recombinante. Se comprobó la actividad antigénica y alergénica in vitro de P34, y se demostró la reactividad cruzada de P34 con proteínas de LV. Se obtuvo además un modelo estructural y diversos péptidos derivados de P34 candidatos a ser posibles epitopes.