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Melanophryniscus es un género de sapos sudamericanos compuesto actualmente por 31 especies, la mayoría de ellas distribuidas en tres grupos fenéticos (grupos M. moreirae, M. stelzneri y M. tumifrons). En estudios filogenéticos previos, se recuperó dentro del grupo M. stelzneri un clado compuesto por las especies de distribución más austral del género (M. cupreuscapularis, M. diabolicus, M. dorsalis, M. estebani, M. montevidensis, M. nigricans y M. stelzneri; clado pampeano). Sin embargo, las especies que componen este clado no se recuperaron como monofiléticas y, a su vez, manifiestan un elevado polimorfismo en sus patrones de coloración. Estos aspectos dificultan la asignación taxonómica de los individuos. Por lo tanto, en este trabajo nos propusimos: a) explorar los límites de las especies del clado pampeano empleando métodos de delimitación de especies basados en un solo locus, y b) cuantificar la variabilidad genética de los distintos agrupamientos inferidos. Para ello, se obtuvieron secuencias de citocromo b de 71 individuos asignados a las especies M. cupreuscapularis, M. diabolicus, M. dorsalis, M. estebani, M. montevidensis y M. stelzneri. Las relaciones entre los individuos se estimaron mediante red de haplotipos y genealogías (Máxima parsimonia, Máxima verosimilitud e Inferencia Bayesiana). Posteriormente, se aplicaron distintos algoritmos de delimitación de especies a partir de distancias genéticas (ASAP) y árboles génicos (mPTP, GMYC y bGMYC). Se detectaron 38 haplotipos separados, en su mayoría, por escasos pasos mutacionales y sin evidencia de estructuración geográfica. El número de entidades delimitadas varió entre los distintos métodos aplicados; sin embargo, no se pudo descartar la hipótesis nula de panmixia o que todos los individuos analizados pertenecen a un único agrupamiento. Teniendo en cuenta que estos resultados no fueron concluyentes, las distancias genéticas intra- e interespecíficas se calcularon teniendo en cuenta la taxonomía actual. Se observaron divergencias genéticas muy bajas entre las especies, asemejándose incluso a las divergencias genéticas intraespecíficas. Los resultados incongruentes de los diferentes métodos de delimitación, sumados a las limitaciones de propias de estos métodos y a las escasas divergencias genéticas observadas, refuerzan la necesidad de abordar con mayor detalle los límites específicos en este grupo de anfibios. Esto requerirá del empleo de marcadores moleculares adicionales y la incorporación de otras fuentes de evidencia, como por ejemplo, atributos fenotípicos

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