OPTIMIZACIÓN E IMPLEMENTACIÓN DE DISPOSITIVOS DE MICROFLUÍDICA ?lab on a chip? PARA EL CULTIVO DE CÉLULAS PRODUCTORAS DE ANTICUERPOS MONOCLONALES

A. PEÑAHERRERA; C. PAYÉS; M. SIERRA-RODERO; G. ROSERO; C. LASORSA; N. BOURGUIGNON; P. GRANELL; F. GOLMAR; B. LERNER; M. S. PEREZ

Tucuman

Workshop; uF III Reunion Argentina de Microfluidica. mfarg.org; 2016

La aplicación de dispositivos de microfluídica, denominados ?lab on a chip?, para el cultivo celular trae diversas ventajas como la reducción de consumo de muestras y reactivos, control en tiempo real del fluido continuo, propiedades físicas predecibles, cortos tiempos de análisis, baja fluorescencia de fondo, versatilidad en el diseño y portabilidad (1,2). A su vez, las condiciones controladas alcanzadas en los microdispositivos son apropiadas para la producción de proteínas recombinantes a partir de células. Garza-García y col. (3) reportaron por primera vez la producción de anticuerpos monoclonales en microdispositivos demostraron productividades 100 veces mayores que las obtenidas en los sistemas a gran escala. Con el objetivo de dilucidar las condiciones óptimas para el cultivo de células capaces de expresar proteínas recombinantes en los microdispositivos se cultivaron células HEK-293T y CHO bajo diferentes condiciones experimentales. Se evaluó el crecimiento y adhesión celular en microdispositivos de polidimetilsiloxano (PDMS) con diferentes geometrías (microcanales lineales, zigzag, ondas cuadradas y con cisternas) y en presencia o ausencia del agente de adhesión celular poli-D-lisina (4). Se observó que los canales anchos, un flujo de medio reducido y la presencia de poli-D-lisina son más adecuados para la estabilización y adherencia celular (5). Los microdispositivos con diseño de cisternas se utilizaron como modelo para estudiar la distribución de células HEK-293T infectadas con pseudovirus del virus de la estomatitis vesicular (VSV por sus siglas en inglés ?vesicular stomatitis virus?) a través de la expresión de la proteína fluorescente verde (GFP por sus siglas en inglés ?green fluorescent protein?), se observó señal de fluorescencia y viabilidad de las células transfectadas en los dispositivos durante 9 días. Los resultados obtenidos permiten postular la aplicación de los chips como biorreactores para el cultivo de células que pueden producir anticuerpos monoclonales terapéuticos y para evaluar la actividad biológica de fármacos in vitro.