INVESTIGADORES
LERNER Betiana
congresos y reuniones científicas
Título:
PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS UTILIZANDO MATRICES DE INTERCAMBIO IÓNICO ENCAPSULADAS EN DISPOSITIVOS DE MICROFLUÍDICA DEL TIPO LAB ON A CHIP
Autor/es:
MARIA C MARTINEZ CERON; GUSTAVO ROSERO; GUADALUPE LETTIERI; SILVIA A. CAMPERI; BETIANA LERNER; MAXIMILIANO PÉREZ
Lugar:
buenos aires
Reunión:
Workshop; Workshop Fronteras de la Nanobiotecnología III; 2022
Resumen:
El auge de la nanotecnología y la microfluídica con la utilización de nuevos materiales como el polidimetilsiloxano (PDMS) han permitido la fabricación de microdispositivos que integran múltiples ensayos en un solo dispositivo del tipo Lab-on-a-chip. Dentro de los dispositivos de microfluídica se pueden integrar varias operaciones de laboratorio tales como inyección de muestras y reactivos, mezclado, incubación, aislamiento, etc. Básicamente, éstos consisten en una red de microcanales que incorpora diferentes secciones, cámaras, columnas y reservorios. Todos los componentes se integran en una placa de vidrio o material polimérico, con el formato de un portaobjetos de laboratorio. A su vez, esta metodología puede ser fácilmente escalable aumentando en el largo y el ancho en la medida que se conserven la resolución de fluídica en el rango de la microescala. El flujo a través de los microcanales se establece aplicando presión o campos eléctricos. Los sistemas de microfluídica aplicados a la purificación de proteínas permiten separar biomoléculas en forma continua integrando las etapas de adsorción, elución, monitoreo, recolección de muestras de forma automatizable utilizando dispositivos que ocupan menos espacio que los sistemas clásicos. A su vez presenta la posibilidad de incluir dentro de ellos reservorios con matrices cromatográficas como ser de intercambio iónico, interacción hidrofóbica o de afinidad. Las matrices POROSTM tienen una mejor transferencia de masa y resolución basadas en poros más grandes (mejora la perfusión), un diámetro de poro mayor y un tamaño de partículas más pequeño que las matrices de agarosa. Con esto se busca forzar el ingreso de las proteínas por los poros lo que permitirá que puedan interactuar con los ligandos unidos a las bolillas de matriz dentro de los reservorios del chip.El objetivo del trabajo fue comparar el desempeño de estas matrices en un sistema de microfluídica versus los sistemas tradicionales en columna cromatográficas. Para ello se utilizó una proteína modelo (seroalbúmina bovina) y la matriz POROSTM 50D (un intercambiador de aniones débil) y se ensayaron diferentes condiciones de trabajo (buffer de adsorción, buffer de elusión, flujo, etc.) tanto en columna como en chip. Los resultados preliminares mostraron que la columna fue capaz de adsorber el 98 % mientras que cuando el ensayo se realizó en chip no se alcanzó a recuperar ni el 20% de la proteína. Posiblemente esto se debiera a que la mayor parte de las bolillas de matriz se depositaron en el fondo de los wells impidiendo que el flujo de muestra pudiera ingresar y que la proteína se uniese.Estos son los primeros resultados de una nueva línea de investigación pero con ellos se puede concluir que existen varios puntos que se pueden modificar para optimizar el proceso: modificar el diseño del chip; cambiar el tipo de matriz, probar modificar la superficie del chip, entre otros.