Caracterización de variantes alélicas RHD responsables de fenotipos D negativo y D variante en donantes de sangre del Banco Central de Sangre - SIPROSA de la ciudad de Tucumán

TRUCCO BOGGIONE C; MUFARREGE N; MARTÍNEZ OVIEDO M; LUJÁN BRAJOVICH M; MATTALONI S; GARCÍA BORRÁS S; BIONDI C; LERI M; COTORRUELO C

Buenos Aires

Congreso; XVI Congreso Argentino de Medicina Transfusional; 2017

Asociación Argentina de Hemoterapia e Inmunohematología

Fundamento: El locus RHD es altamente polimórfico y posee un gran número de alelos responsables de diferentes fenotipos D. Los alelos RHD silentes generan un fenotipo D negativo, mientras que las variantes DEL originan fenotipos aparentes D negativo (Del) que expresan una cantidad mínima de antígeno D en la membrana eritrocitaria detectada solo por técnicas serológicas especializadas. Además, numerosos alelos RHD son responsables de un fenotipo D variante (Dvar). Este fenotipo se manifiesta a través de una intensidad reducida en las reacciones de hemaglutinación con antisueros anti-D. Algunos fenotipos Dvar son detectados solo en fase antiglobulina. Objetivo: caracterizar a nivel molecular muestras con fenotipos D negativo C y/o E positivo y D variante (Dvar) provenientes de donantes del Banco Central de Sangre - SIPROSA de la ciudad de Tucumán. Materiales y Métodos: se estudiaron 439 muestras de sangre periférica, 327 con fenotipo D negativo portadoras de los antígenos C y/o E y 112 muestras con fenotipo Dvar. Se analizó por una estrategia de PCR multiplex la presencia del gen RHD en todas las muestras. Se investigaron los polimorfismos asociados a los 10 exones del gen RHD (escaneo de exones) en las muestras con fenotipo D negativo portadoras de fragmentos RHD específicos. En el grupo de muestras con fenotipo Dvar se investigaron las variantes alélicas D débiles tipo 1, 2, 3 y 4 y DVII utilizando estrategias de PCR SSP. Además se analizó la presencia de variantes D parciales mediante escaneo de exones. Las muestras no caracterizadas fueron estudiadas por microarreglos de ADN y secuenciación. Resultados: se identificaron 64 muestras con fenotipo D negativo C y/o E positivo portadoras de fragmentos RHD específicos (D-/RHD+). La estrategia de escaneo de exones permitió detectar los siguientes alelos silentes: RHD-CE(3-9)-D (n=4), RHD-CE(4-7)-D (n=1), RHD-CE-Ds (n=31) y el alelo DEL RHD-CE(4-9)-D (n=1). A través de la técnica de microarreglos de ADN se detectó el alelo DEL RHD(IVS3+1G>A) (n=1). Los estudios de secuenciación permitieron caracterizar las variantes silentes RHDΨ (n=1), RHD(581insG) (n=14), RHD*1001A (n=1) y los alelos DEL RHD(46T>C) (n=7) y RHD*1248insG (n=1). Las variantes alélicas identificadas en las muestras con fenotipo Dvar utilizando estrategias de PCR SSP fueron: D débil tipo 1 (n=17), D débil tipo 2 (n=12), D débil tipo 3 (n=12), D débil tipo 4 (n=24), DFR-2 (n=2), DVI tipo 4 (n=8), DVII (n=2). Los estudios de secuenciación permitieron caracterizar los alelos: D débil tipo 59 (n=2), D débil tipo 1/RHD-CE-Ds (n=1), D débil tipo 5 (n=1) y DMH (n=2). Además se detectaron 3 nuevas variantes alélicas: RHD*763A (n=1), RHD*764A (n=1) y RHD*359A (n=23). Conclusión: considerando que los pacientes (receptores de sangre / embarazadas) con fenotipo Dvar portadores de las variantes alélicas D débil tipo 1, D débil tipo 2 y D débil tipo 3 deben ser considerados RhD positivo ya que no son susceptibles de desarrollar una aloinmunización hacia el antígeno D, las estrategias de biología molecular aplicadas al estudio del locus RH constituyen una herramienta útil para optimizar la compatibilidad transfusional en los Bancos de Sangre y racionalizar la administración de la inmunoprofilaxis en embarazadas. Además, el conocimiento de las bases moleculares del fenotipo D negativo permite desarrollar estrategias de genotipificación confiables que muestren una estricta correlación fenotipo / genotipo para la población en estudio.