Polimorfismo molecular del locus RHD en donantes de sangre del Centro Regional de Hemoterapia ? Hospital de Pediatría Dr. Garrahan

TRUCCO BOGGIONE C; MUFARREGE N; PUPPO M; ABATEMARCO V; IZAGUIRRE S; LUJÁN BRAJOVICH M; MATTALONI S; BIONDI C; KUPERMAN S; COTORRUELO C

Buenos Aires

Congreso; XVI Congreso Argentino de Medicina Transfusional; 2017

Asociación Argentina de Hemoterapia e Inmunohematología

Fundamento: el gen RHD posee múltiples alelos responsables de expresiones alteradas del antígeno D (variantes D) que se manifiestan a través de una intensidad reducida en las reacciones de hemaglutinación con antisueros anti-D. Por otro lado, diferentes variantes alélicas RHD son responsables de fenotipos D negativo. Objetivo: el objetivo de este trabajo fue investigar las bases moleculares responsables de los fenotipos D negativo y D variante (Dvar) en muestras de donantes de sangre. Materiales y Métodos: se estudiaron 168 muestras de sangre periférica, 132 con fenotipo D negativo portadoras de los antígenos C y/o E y 36 muestras con fenotipo Dvar. En todas las muestras se investigó la presencia del gen RHD a través de una estrategia de PCR multiplex. Aquellas muestras D negativo portadoras de fragmentos RHD específicos (D-/RHD+) fueron analizadas a través de PCRs alelo específicas que estudian polimorfismos asociados a los 10 exones del gen RHD (escaneo de exones). En el grupo de muestras con fenotipo Dvar se investigaron las variantes alélicas D débiles tipo 1, 2, 3 y 4 y DVII utilizando estrategias de PCR SSP. Además se analizó la presencia de variantes D parciales mediante escaneo de exones. Las muestras D negativo y Dvar no caracterizadas por las estrategias moleculares anteriores fueron analizadas por microarreglos de ADN y secuenciación. Resultados: los estudios moleculares permitieron detectar 19 muestras D-/RHD+. Dentro de este grupo se identificaron alelos nulos: RHD-CE-Ds (n=11), RHD-CE(3-9)-D (n=3), RHD(581insG) (n=1) y alelos DEL: RHD(M295I) (n=2), RHD(IVS3+1G>A) (n=1) y RHD(46T>C) (n=1). En las muestras con fenotipo Dvar se detectaron las variantes alélicas D débil tipo 1 (n=10), D débil tipo 2 (n=16). Además se identificaron los alelos D parciales D débil tipo 4 (n=1), D débil tipo 45 (n=1), DFR-2 (n=1), DVa (n=1), DVI tipo 1 (n=1) DVI tipo 4 (n=1). Por otro lado, mediante estudios de secuenciación se caracterizaron dos nuevas variantes alélicas RHD*325A (n=2) y RHD*359A (n=2), ambas responsables de sustituciones aminoacídicas y de una expresión débil del antígeno D. Cabe destacar que el 72,2% de las muestras con fenotipo Dvar resultaron portadoras de alelos D débil tipo 1 y D débil tipo 2. Conclusiones: los pacientes (receptores de sangre / embarazadas) portadores de estas variantes alélicas deben ser considerados RhD positivo ya que no son susceptibles de desarrollar una aloinmunización hacia el antígeno D. La genotipificación RHD resulta importante para optimizar la compatibilidad transfusional en los Servicios de Medicina Transfusional. Además, el conocimiento de las bases moleculares del fenotipo D negativo permite desarrollar estrategias de genotipificación confiables que muestren una estricta correlación fenotipo / genotipo para la población en estudio.