Microscopia confocal en la detección de igg unida a eritrocitos senescentes

ENSINCK A; RUCCI A; COTORRUELO C; GARCÍA BORRÁS S; BIONDI C; RACCA A

Rosario

Congreso; V Congreso y 9º Encuentro Bioquímico; 2009

Areas Clínicas - Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas

Recientes investigaciones consideran que la unión de IgG autóloga a la proteína banda 3 de la membrana eritrocitaria, sería determinante de la remoción de los glóbulos rojos (GR) en situaciones fisiológicas y patológicas. La prueba de la antiglobulina directa, utilizada para demostrar la sensibilización eritrocitaria no permite detectar esta IgG autóloga, debido al bajo número de moléculas. El objetivo de este trabajo fue analizar la presencia de anticuerpos unidos in vivo en poblaciones eritrocitarias de distintas edades: GR jóvenes (J) y GR senescentes (Se). Se trabajó con muestras de sangre periférica provenientes de dadores voluntarios sin patología demostrable, que concurrieron al Servicio de Hemoterapia del Hospital Provincial del Centenario de Rosario (n=7). Las subpoblaciones celulares (GRJ y GRSe) fueron obtenidas por gradiente de densidad con Percoll. Se utilizaron GR O RhD positivos sensibilizados con un anticuerpo anti-D de clase IgG obtenido en nuestro laboratorio, como control positivo. Las distintas suspensiones eritrocitorias fueron incubadas con anti-IgG humana marcada con Alexa 488, durante 60 minutos a temperatura ambiente en oscuridad. Posteriormente, las diferentes suspensiones de GR fueron lavadas con solución salina y observadas por microcopía confocal, utilizando láser azul 488. Las imágenes obtenidas fueron procesadas con el programa EZ.C1 Gold.Version 3.70. Los resultados hallados mostraron fluorescencia en los GRSe, aunque con una menor intensidad que la observada en el control positivo. En cambio los GRJ no presentaron imágenes de fluorescencia. La microscopia confocal permite detectar la unión de IgG autóloga a los GRSe, que no puede ser identificada por las pruebas inmunohematológicas clásicas. Aunque esta metodología utiliza instrumental de alto costo, podría ser una herramienta para la demostración de la participación del sistema inmune en el mantenimiento de la homeostasis celular.