Fraccionamiento de poblaciones eritrocitarias de distintas edades usando gradientes preformados de Percoll

LUJÁN M; RUCCI A; ACOSTA L; COTORRUELO C; RACCA L; BIONDI C; RACCA A

La Falda - Córdoba

Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología,; 2008

SAI

Los métodos empleados para la obtención de glóbulos rojos (GR) de distintas edades se basan en el aumento de densidad que presentan durante su envejecimiento. El Percoll es un polímero sintético con propiedades fisicoquímicas adecuadas para trabajar con células vivas. El objetivo de este trabajo fue desarrollar una técnica para la separación de GR de distintas edades empleando gradientes preformados de Percoll (GP). Muestras de sangre periférica de dadores voluntarios (n=19) fueron procesadas para obtener GR Senescentes (GRSe) y GR Jóvenes (GRJ), por centrifugación en GP y por centrifugación diferencial (CD). Se evaluaron las fracciones eritrocitarias obtenidas analizando: volumen corpuscular medio (VCM) en un contador SYSMEX SF-3000; % de reticulocitos (R) con azul brillante de cresil; actividad de enzimas antioxidantes: Glucosa 6 fosfato deshidrogenada (G6PD) y Citocromo b5 reductasa unida a membrana (b5Rm) por métodos espectrofotométricos y % de Monocitos Activos (MA) por el ensayo de eritrofagocitosis. Los valores promedios de los parámetros estudiados en las poblaciones de GRJ y GRSe separadas por GP y CD, fueron analizados por t de Student para muestras dependientes:     Variables   GP   CD   p   GRJ GRSe GRJ GRSe   VCM (fL) 89.03 87.01 89.95 87.36 < 0.005 Reticulocitos (%) 2.15 0.50 2.18 0.49 < 0.0001 G6PD (UIG6PD/gHb) 7.73 5.22 7.11 4.64 < 0.005 b5Rm(Uhbi-R/mgProt) 488.00 450.25 491.73 441.27 < 0.005 MA (%) 3.00 16.58 3.10 16.73 < 0.0001   Para evaluar si ambas técnicas de separación permiten obtener en promedio la misma diferencia entre las poblaciones de GRJ y GRSe, para las variables analizadas, se utilizó t de Student para muestras independientes. Los valores fueron: VCM (GP:2.02±1.49 vs CD:2.59±2.07, p>0.30); R (GP:1.65±0.21 vs CD:1.69±0.36, p>0.60); G6PD (GP:2.51±2.12 vs CD:2.47±1.52, p>0.90); b5Rm (GP:37.75±30.90 vs CD:50.46±45.29, p>0.30) y MA (GP:-13.58±2.04 vs CD:-13.58±2.04, p>0.90). Los resultados obtenidos indican que el método de GP permite obtener suspensiones eritrocitarias de distintas edades, con una eficiencia comparable a la observada en la separación por CD. Además, como la técnica de GP logra un mayor rendimiento de las poblaciones de GRJ y GRSe, sería recomendable en las investigaciones de los mediadores involucrados en el proceso de senescencia eritrocitaria, que demandan la utilización de gran cantidad de muestra.