Nuevo alelo RHD responsable de un fenotipo D variante

TRUCCO BOGGIONE C; LUJÁN BRAJOVICH M; MATTALONI S; RACCA L; GARCÍA BORRÁS S; BIONDI C; COTORRUELO C

Rosario

Conferencia; XVII Congreso y XXXV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2015

Sociedad de Biología de Rosario

El antígeno D del Sistema Rh presenta variaciones cualitativas (fenotipo D parcial) y cuantitativas (fenotipo D débil y DEL) en su expresión que en conjunto se denominan fenotipo D variante (Dvar). Este fenotipo se manifiesta a través de una intensidad reducida en las reacciones de hemaglutinación con antisueros anti-D. Los alelos RHD responsables de un fenotipo Dvar se encuentran, generalmente, en desequilibrio de ligamiento con alelos RHCE. La caracterización molecular de las variantes D es de fundamental importancia en hemoterapia ya que permite decidir la conducta transfusional adecuada. El objetivo de este trabajo fue estudiar las bases moleculares responsables de la expresión aberrante del antígeno D en muestras portadoras del antígeno E. Se estudiaron 88 muestras con fenotipo Dvar, C(-), c(+), E(+), e(+) de diferentes efectores de salud del país (Rosario, n=20; La Plata, n=19; CABA, n=14; Córdoba, n=8 y Tucumán, n=27). Se determinó el fenotipo Rh completo por técnicas de hemaglutinación en tubo. El estudio del antígeno D se realizó utilizando un reactivo monoclonal anti-D IgM+IgG (clones TH-28+MS-26) y 3 reactivos monoclonales anti-D IgM (clones MS-201, RUM-1 y LDM1+ESD1M). Para determinar el fenotipo Rh completo se utilizaron los siguientes anticuerpos monoclonales IgM: anti-C (clon MS24), anti-c (clon MS33), anti-E (clon MS260) y anti-e (clones MS16+MS21+MS63). Mediante estrategias de PCR SSP se investigó la presencia de la variante alélica D débil tipo 2 y se analizaron polimorfismos asociados a los 10 exones del gen RHD. Las muestras no caracterizadas fueron estudiadas por la técnica de secuenciación. Los estudios serológicos mostraron que todas las muestras presentaban una aglutinación débil con los anticuerpos anti-D utilizados y no se observó alteración en la expresión de los antígenos c, E y e. Los estudios de PCR SSP identificaron al alelo D débil tipo 2 en el 64,8% (n=57) de las muestras. Por otro lado, los análisis de secuenciación revelaron la presencia de los alelos D débil tipo 5 (2,3%; n=2), RHD(911T>A) (1,1%; n=1) y DFR-2 (1,1%; n=1). Además, estos estudios revelaron la presencia de un polimorfismo no reportado, presente en el 21,6% de las muestras analizadas (n=19). Esta nueva variante alélica está caracterizada por la mutación puntual 359C>A, localizada en el exón 3 del gen RHD y fue denominada RHD(359C>A). La mutación hallada provoca una sustitución aminoacídica en el cuarto dominio transmembrana de la proteína RhD, característica del fenotipo D débil. El porcentaje de muestras portadoras del polimorfismo 359C>A en Córdoba (37,5%) y Tucumán (48,2%) fue significativamente mayor que en Rosario, CABA y La Plata (0%, 7,1% y 10,5%, respectivamente). Los resultados obtenidos en los estudios serológicos y moleculares, indicarían que el nuevo alelo RHD(359C>A) es responsable de un fenotipo D débil. Debido a que este polimorfismo no ha sido reportado en poblaciones europeas o africanas, podríamos atribuir la alta frecuencia hallada en Córdoba y Tucumán al mayor aporte amerindio característico de estas regiones del país. Nuestros hallazgos demuestran que los estudios moleculares son un complemento necesario para la caracterización de muestras con fenotipo D alterado permitiendo identificar variantes cuantitativas que expresan todos los epitopes del antígeno D. De esta manera, resultarían de utilidad para implementar una conducta transfusional u obstétrica adecuada.