Polimorfismo molecular del locus RH

PERCARA L; TRUCCO BOGGIONE C; MATTALONI S; LUJÁN BRAJOVICH M; GARCÍA BORRÁS S; BIONDI C; COTORRUELO C

Rosario

Congreso; XVI Congreso y XXXIV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2014

Sociedad de Biología de Rosario

Las bases moleculares del polimorfismo del sistema Rh son el producto de diferentes rearreglos genéticos que ocurren en el locus RH. Se ha reportado que algunos individuos con fenotipo D negativo son portadores de alelos nulos, responsables de resultados falsos positivos en las estrategias de genotipificación RHD. Por otro lado, se han descripto fenotipos D variante en los cuales el gen RHD presenta alteraciones que modifican la expresión de la proteína RhD. En la actualidad se considera que los individuos portadores de estas variantes desarrollan una respuesta inmune luego de un desafío con glóbulos rojos D positivo. Sin embargo, se ha demostrado que los receptores con variantes D débil tipo 1, 2 y 3, no producen aloanticuerpos anti-D. El objetivo de este trabajo fue investigar el polimorfismo molecular del locus RH en individuos que concurrieron a un laboratorio privado de la ciudad de Rosario. Se estudiaron 1900 muestras de sangre periférica de pacientes voluntarios. Se determinó el fenotipo Rh completo por técnicas de hemaglutinación utilizando anticuerpos monoclonales específicos: anti-D (clones TH-28 + MS-26), anti-C (clon MS24), anti-c (clon MS33), anti-E (clon MS260) y anti-e (clones MS16 + MS21 + MS63). Las muestras se clasificaron en 2 grupos: aquellas que presentaron un fenotipo D negativo (M1) y las que mostraron una expresión disminuida del antígeno D detectada por aglutinación directa débil (semicuantificada entre +/- y ++) o por el test de Coombs indirecto (M2). En M1 se investigó la presencia del gen RHD utilizando una estrategia de PCR multiplex. En las muestras portadoras de fragmentos del gen RHD (RhD-/RHD+) se estudió la presencia del alelo RHDψ. En M2 se investigaron las variantes alélicas D débil tipo 1, 2, 3 y 4 y la variante parcial DVII. Las muestras no caracterizadas de M1 y M2 se analizaron por PCR-SSP amplificando cada uno de los 10 exones del gen RHD para determinar la presencia de alelos híbridos. Las muestras no identificadas fueron secuenciadas. Los estudios serológicos permitieron clasificar 173 muestras (9,11%) con fenotipo D negativo y 17 muestras (0.89%) con expresión disminuida del antígeno D. Los estudios moleculares realizados en M1 permitieron identificar 3 alelos RHD nulos: 2 alelos RHDψ y 1 alelo RHD(581insG). En M2 se detectaron 4 alelos D débil tipo 1, 2 tipo 2, 1 tipo 3, 3 tipo 4, 1 tipo 59, 1 alelo DVII y 1 alelo DIV tipo 5. En este estudio se halló de manera excepcional la variante RHD en un fenotipo r?r siendo la primera descripción de este alelo asociado a la presencia del antígeno C. Se han identificado tanto alelos caucásicos (D débil tipo 1, 2, 3 y 59, DVII) como alelos asociados a la etnia africana (D débil tipo 4, DIV tipo 5 y RHDψ) confirmando el aporte genético de individuos del África Subsahariana al acervo molecular de los pacientes en la población estudiada. La caracterización molecular de estos alelos constituye una herramienta útil en las prácticas transfusionales y obstétricas. La selección de unidades hemocompatibles en los Bancos de Sangre permitiría preservar las escasas unidades D negativo almacenadas en los Servicios de Medicina Transfusional, y una administración correcta de profilaxis con inmunoglobulina anti-D a mujeres embarazadas.