ANÁLISIS DE IGG UNIDA A ERITROCITOS SENESCENTES POR UN INMUNOENSAYO INDIRECTO

ENSINCK A; MARINI A; COTORRUELO C; GARCÍA BORRÁS S; RACCA L; BIONDI C; RACCA A

Rosario - Argentina

Congreso; III Congreso y 7º Encuentro Bioquímico 2005; 2005

Areas Clínicas de la Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Universidad Nacional de Rosario

Uno de los mecanismos propuestos para la remoción selectiva de glóbulos rojos senescentes (GRSe) es iniciado por la unión de IgG autóloga al llamado antígeno de senescencia que se expresa sobre la membrana eritrocitaria. La cantidad este autoanticuerpo no es suficiente para obtener resultados positivos con la Prueba de la Antiglobulina Directa. El objetivo de este trabajo fue determinar pequeñas cantidades de IgG en la membrana de GRSe utilizando un inmunoensayo con antiglobulina conjugada con una enzima. Se trabajó con muestras de sangre entera de dadores voluntarios con serología negativa (n= 30), obteniendo GR jóvenes (J) y Se por centrifugación diferencial. Las distintas suspensiones eritrocitarias en una concentración de 8x109 cel/mL, fueron incubados con anti-IgG humana conjugada con peroxidasa, durante 90 minutos a temperatura ambiente en agitación continua. Posteriormente se centrifugaron y se transfirieron alícuotas de los sobrenadantes a microplacas sensibilizadas con IgG humana. Luego de sucesivos lavados se agregó el sustrato de la peroxidasa (TMB) y se determinó la cantidad remanente de anticuerpos por absorbancia a 450 nm. Se realizaron controles positivos con GR O Rh (D)+ sensibilizados con anti-D de clase IgG y controles negativos sin GR. También se realizaron controles de sensibilización de las placas. Los valores de concentración  (mg/mL) de IgG unidas a la superficie eritrocitaria fueron con: a) GRSe: 13.31 x 10-4 ±1,57 x 10-4; b) GRJ: 3.35 x 10-4 ±1,39 x 10-4. Los resultados obtenidos indican un consumo de antiglobulina (p<0.01)atribuible a la presencia de IgG en la membrana del GRSe. Este inmunoensayo enzimático puede ser una herramienta útil en la determinación de pequeñas cantidades de anticuerpos unidas a la membrana eritrocitaria.