EFECTO DE LOS EPITOPES C Y E EN LA EXPRESIÓN DEL ANTÍGENO D ERITROCITARIO

LUJÁN M; TRUCCO BOGGIONE C; ENSINCK A; MATTALONI S; RACCA L; BIONDI C; COTORRUELO C

Zavalla

Congreso; XV Congreso y XXXIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2013

Sociedad de Biología de Rosario

El antígeno D del Sistema Rh es el más inmunogénico y polimórfico de la membrana eritrocitaria. Se caracteriza por presentar variaciones cualitativas y cuantitativas en su expresión (variantes D) que dificultan su identificación serológica, siendo responsables de fenómenos de aloinmunización.La identificación y cuantificación de los epitopes del antígeno D por técnicas más sensibles que la hemaglutinación constituye un recurso apropiado para definir la implicancia clínica de las variantes D. El objetivo de este trabajo fue analizar la influencia de los epitopes C y E en la expresión del antígeno D por citometría de flujo. Se determinó el fenotipo Rh en suspensiones eritrocitarias mediante técnica de hemaglutinación utilizando anticuerpos monoclonales anti-D, C, c, E y e. Muestras RhD positivas (n=34) con distintos fenotipos Rh y controles RhD negativos fueron incubados 30 minutos a 37ºC con un anticuerpo monoclonal IgG anti-D. Posteriormente, se lavaron los glóbulos rojos 3 veces con PBS y finalmente se incubaron con anti-IgG humana marcada con Alexa 488 como anticuerpo secundario. Las muestras fueron procesadas en un citómetro FACSAria II. Se adquirieron 100.000 eventos y los datos fueron analizados mediante el software FACSDiva. El análisis estadístico demostró que la mediana (rango intercuartil) de la variable mediana de la intensidad de fluorescencia asociada a la expresión del antígeno D para muestras portadoras del epitope C (n=26, fenotipos Ccee, CCee, CcEe) fue de 13605.0 (12196.0) mientras que para las muestras que no expresaban este epitope (n=8, fenotipos ccEe, ccEE) el valor obtenido fue 19088.5 (15290.0). Por otro lado, las muestras portadoras del epitope E (n=17, fenotipos CcEe, ccEe y ccEE) presentaron un valor de mediana de 19379.0 y rango intercuartil de 13010.0, mientras que en las muestras que no expresaban este epitope (n=17, fenotipos Ccee y CCee) dichos valores fueron 12736.0 y 5327.0. Al aplicar el test de Mann-Whitney puede concluirse que los valores de la variable estudiada son significativamente mayores en las muestra que no expresan el epitope C respecto de las que sí lo expresan (p<0.05) y menores en las muestras no portadoras del epitope E respecto de las muestras que sí lo expresan (p<0.005). Los resultados obtenidos sugieren que el epitope C tiene un efecto negativo en la expresión de la proteína RhD. Por otro lado, muestras portadoras del epitope E presentan un mayor grado de expresión del antígeno D con respecto a muestras fenotípicamente ee. Teniendo en cuenta que la expresión normal de los antígenos del Sistema Rh en la membrana eritrocitaria depende de una correcta integración de la glicoproteína RhAG y que la cadena polipeptídica RhCe comparte un mayor grado de homología que RhcE con la proteína RhD, postulamos que la variante RhCe se uniría a la glicoproteína RhAG con mayor afinidad que el polipéptido RhD. Por otro lado, es probable que mutaciones presentes en el gen RHAG o en su región promotora puedan resultar en una disminución cuantitativa de la expresión de esta glicoproteína o alterar los sitios de interacción con el polipéptido RhD, exacerbando la expresión de la variante RhCe en detrimento de la proteína RhD.