Alelos RHD débiles, parciales y nulos. Importancia en Medicina Transfusional

LUJÁN M; TRUCCO BOGGIONE C; GARCÍA BORRÁS S; BIONDI C; RACCA A; COTORRUELO C

Rosario

Congreso; XII Congreso. XXX Reunión Anual. Sociedad de Biología de Rosario; 2010

El gen RHD posee múltiples alelos responsables de expresiones alteradas del antígeno D y alelos nulos presentes en individuos RhD negativos. Actualmente se considera que los pacientes con expresión disminuída de los epitopes D, desarrollan una respuesta inmune luego de la transfusión con unidades RhD positivas. Sin embargo, estudios recientes demostraron que los receptores con variantes D débiles tipo 1, 2 y 3, no producen anticuerpos anti-D. El objetivo de este trabajo fue caracterizar las variantes alélicas del gen RHD en individuos de la ciudad de Rosario. Se estudiaron 18378 muestras de sangre periférica de dadores voluntarios. Se determinó el fenotipo Rh completo por técnicas de hemaglutinación utilizando anticuerpos monoclonales específicos: anti-D (clones TH-28 + MS-26), anti-C (clon MS24), anti-c (clon MS33), anti-E (clon MS260) y anti-e (clones MS16 + MS21 + MS63). Se seleccionaron las muestras que presentaron una expresión disminuida del antígeno D detectada por aglutinación directa débil (++) o por el test de Coombs indirecto y los fenotipos RhD negativos. En el ADN genómico de estas muestras se investigó la presencia del gen RHD utilizando una estrategia de PCR multiplex. Posteriormente, se amplificaron por PCR SSP cada uno de los 10 exones del gen RHD, se investigaron las variantes alélicas D débiles Tipo 1, 2, 3 y 4, la variante DVII y los alelos RHDψ y r’s. Las muestras no caracterizadas fueron secuenciadas. Los estudios serológicos permitieron clasificar 67 (0.36%) muestras con expresión débil del antígeno D y 1315 (7.16%) fenotipos RhD negativos. Los estudios moleculares realizados en las muestras con expresión disminuida del antígeno D identificaron 16 alelos RHD débil Tipo 1, 9 Tipo 2, 7 Tipo 3, 15 Tipo 4, 2 Tipo 59, 1 DVa, 1 DIVa, 16 DVII. En las muestras con fenotipo RhD negativo se detectaron 18 alelos RHD nulos: 7 alelos RHDψ, 6 r’s; 4 alelos híbridos RHD-CE(3-9)-RHD; 1 RHD(361del11) y 4 alelos responsables de fenotipos DEL: 3 RHD46(T>C); 1 RHD(M295I). Se observó una correlación entre el fenotipo Rh completo y los diferentes alelos encontrados. Las técnicas serológicas no determinan con precisión las distintas variantes débiles del antígeno D. La caracterización molecular de estos alelos constituye una herramienta útil para la selección de unidades hemocompatibles en los Bancos de Sangre.