Análisis de las bases moleculares del haplotipo R0 en individuos con fenotipo D débil tipo 1

PRINCIPI C; TRUCCO BOGGIONE C; LUJÁN BRAJOVICH M; MATTALONI S; ENSINCK A; BIONDI C; COTORRUELO C

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Jornada; I Jornadas de Ciencia y Tecnología de la FBIOyF - UNR; 2021

Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas - UNR

Introducción. El sistema Rh presenta gran interés clínico en Medicina Transfusionaldebido a la participación de sus anticuerpos en los procesos de destrucción inmune delos glóbulos rojos. Este grupo sanguíneo es altamente polimórfico e inmunogénico. Ellocus Rh está codificado por los genes RHD y RHCE los cuales se disponengenéticamente en tándem y se heredan como haplotipos, por lo que algunos alelos RHDy RHCE muestran desequilibrio de ligamiento. Se han descripto más de 400 variantesalélicas que generan antígenos Rh variantes (parciales y/o débiles), fenotipos carentesde antígenos Rh de alta prevalencia y expresión de antígenos Rh de baja incidencia.Las variantes alélicas en cis forman haplotipos aberrantes que pueden ser responsablesde la producción de aloanticuerpos complejos en pacientes que se encuentran bajo unprograma de transfusión crónica. El objetivo de este trabajo fue analizar las basesmoleculares que subyacen en el gen RHCE en donantes de sangre portadores de lasvariantes alélica RHD*D débil tipo 1.Resultados. Se analizaron 20 muestras con fenotipo Ddébil tipo 1ccee y 41 muestras confenotipo Dccee previamente obtenidas de pacientes no relacionados provenientes dediferentes efectores de salud de nuestro país. Se obtuvo ADN genómico a través delmétodo de salting-out. Se estudió el estado de la cigosidad del gen RHD utilizando unaestrategia de amplificación de las cajas Rhesus seguida de la digestión enzimática conla endonucleasa Pst I. Se utilizó una estrategia de PCR-SSP para detectar los SNVs(single nucleotide variation) c.48C y c.48G en el gen RHCE. El análisis molecularpermitió la detección del polimorfismo c.48C y c.48G en todas las muestras Ddébil tipo 1 enR0 (n=20, 100%). Por otro lado 19 de 41 (46.3%) muestras con fenotipo Dccee portanlos SNVs c.48C and c.48G, mientras que 22 muestras (53.7%) mostraron la presenciade una Guanina en la posicion 48. Todas las muestras Ddébil tipo 1 en R0 resultaron serhemicigotas para RHD y solo 1 muestra fue homocigota con fenotipo Dccee, ambasfueron c.48C/G.Conclusiones. Estos resultados sugieren que los alelos RHD*D débil tipo 1 estánvinculados a la variante RHCE*ce.01 en los haplotipos R0. El cambio de c.48G> C en elexón 1 de RHCE conduce a un cambio en los aminoácidos p.Trp16Cys, generalmentepresente en alelos RHCE*Ce y RHCE*CE, mientras que el Trp en posición 16 estáasociado con los alelos RHCE*ce y RHCE*cE. La presencia de Cys16 en RHCE*ce seasocia con el haplotipo R0 en africanos, lo que conduce a una expresión del antígeno edébil en los glóbulos rojos. El hallazgo del 46,3% de las muestras de Dccee que llevanalelos RHCE*ce.01 se puede atribuir a la ascendencia africana en la poblaciónargentina. Los eventos de recombinación genética que ocurren en una población conaporte de diferentes etnias, podrían explicar la fuerte asociación entre un alelo caucásico(RHD*D débil tipo1) y un alelo africano (RHCE*ce.01) encontrado en haplotipos R0.