Estudio de biomarcadores de senescencia eritrocitaria por citometría de flujo

ENSINCK A; LUJÁN BRAJOVICH M; MATTALONI S; GARCÍA BORRÁS S; PISKULIC L; COTORRUELO C; BIONDI C

Virtual

Jornada; I Jornadas de Ciencia y Tecnología de la FBIOyF - UNR; 2021

Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas - UNR

Introducción: Los glóbulos rojos (GRs) maduros carecen de síntesis de proteínas ycomo consecuencia no pueden restaurar enzimas inactivadas, citoesqueleto dañado nilas proteínas de membrana. Modificaciones en la proteína Banda 3, producidas porruptura proteolítica o agregación como resultado de procesos oxidativos, dan lugar a laformación o exposición de un sitio antigénico, denominado antígeno de senescenciaeritrocitario (ASE), que induce la acumulación de IgG y C3 autóloga en la superficiecelular favoreciendo la remoción de los GRs. Una ruptura por oxidación de la proteínaBanda 3 es sugerida como parte del mecanismo que conduce a la generación de unantígeno celular senescente. Por otro lado, la exposición de fosfatidilserina (FS) en lacapa externa de la membrana eritrocitaria y la disminución en la expresión de CD47(proteína inhibitoria de la fagocitosis de los eritrocitos por los macrófagos del SistemaFagocítico Mononuclear) también constituyen una señal de muerte eritrocitaria oeriptosis, importante para el reconocimiento y la eliminación de células de lacirculación sanguínea. El objetivo de este trabajo fue evaluar los niveles de expresiónde IgG autóloga, depósitos de la fracción C3 del complemento, FS- basado en laafinidad de unión a la Anexina V y CD47, en poblaciones de GRs Jóvenes (J) ySenescentes (Se) de muestras de GRs mediante citometría de flujo (CMF). Serecogieron muestras de sangre (n =49) de donantes sin patología demostrable entubos con EDTA. Se utilizó un citómetro FACSAriaII y el programa FACSDiva para laadquisición y análisis. Las poblaciones de GR fueron seleccionadas en un dot-plotFSC/SSC en escala logarítmica. Teniendo en cuenta que FSC representa el tamañocelular y SSC la complejidad celular interna; asumimos que la población de GRSe seencuentra en la zona de < FSC y > SSC. El análisis de gráficos de puntos basado enlos parámetros de dispersión directa versus dispersión lateral mostró dos poblacionesde GR de diferentes tamaños y densidades. Suspensiones de GRs en PBS fueronincubadas con anticuerpos monoclonales específicos conjugados con fluorocromos.Resultados: El porcentaje de células positivas para IgG y C3 fue significativamentemayor en la población de GRs senescentes. La fracción de eritrocitos positivos aanexina-V también fue mayor en los eritrocitos senescentes, mientras que la expresiónde CD47 fue menor en esta población. Estos resultados indican que la CMF permitediferenciar poblaciones de GRs de diferentes edades, convirtiendo esta herramientaen una alternativa útil para estudiar el envejecimiento eritrocitario. Conclusión: Estoshallazgos contribuirían a una mejor comprensión de los mecanismos implicados en lasenescencia eritrocitaria. La correcta descripción de este proceso será de granimportancia para dilucidar el destino de los GRs en circunstancias patológicas y lasobrevida de los hematíes después de la transfusión, permitiendo optimizar el empleode los procedimientos más racionales en los Bancos de Sangre.