Estudio preliminar de la estructura molecular alelos RHCE en individuos D negativos.

PRINCIPI C; TRUCCO BOGGIONE C; MUFARREGE N; LUJÁN BRAJOVICH M; MATTALONI S; ENSINCK A; BIONDI C; COTORRUELO C

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Congreso; XXII Congreso y XL Reunión anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2020

Sociedad de Biologia de Rosario

El sistema Rh está codificado por los genes RHD y RHCE, los cuales se disponen genéticamente en tándem y comparten un 97% de homología. Los antígenos más inmunogénicos codificados por estos genes son D, C, c, E, e y desempeñan un papel central en las reacciones hemolíticas transfusionales, en la inmunización de pacientes politransfundidos, en la patogénesis de la Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal y algunas Anemias Hemolíticas Autoinmunes. El gen RHD codifica para la proteína RhD que se expresa en la membrana plasmática del eritrocito. La presencia o ausencia del gen RHD en el ADN humano determina las bases moleculares del polimorfismo asociado a los fenotipos D positivo y D negativo. Los individuos D positivo poseen uno o dos genes RHD por célula (hemi u homocigotas) mientras que el fenotipo D negativo resulta de la ausencia del gen RHD. El gen RHCE es el responsable de la expresión de los antígenos CcEe en la proteína RhCE de manera combinada (RHCe, RHce, RHcE y RHCE). Diferentes mecanismos moleculares pueden alterar la expresión de los antígenos Rh. Las modificaciones genéticas mencionadas son responsables de más de 500 alelos RH descriptos, asociados generalmente a expresiones débiles, parciales o nulas de dichos antígenos. Las variantes alélicas RHD y RHCE pueden encontrarse asociadas formando haplotipos aberrantes, de gran importancia clínica en los estudios de compatibilidad transfusional. Los haplotipos RH aberrantes generan proteínas alteradas que pueden carecer de epitopes de alta incidencia y expresar variaciones cualitativas de los antígenos Rh, siendo los pacientes portadores susceptibles de desarrollar una aloinmunicación postransfusional. El objetivo de este trabajo fue analizar los polimorfismos del gen RHCE en donantes de sangre provenientes de efectores de salud de diferentes regiones del país portadoras del fenotipo D negativo. Se estudiaron 218 muestras de ADN de donantes provenientes de efectores de salud de Tucumán (n=102), La Plata (n=66), Jujuy (n=16) y el Hospital Garrahan (n=34), anteriormente tipifcadas por técnicas serologicas como individuos D negativo. Se obtuvo ADN genómico a través del método de salting-out. En una etapa anterior se confirmó con estudios de biología molecular la ausencia del gen RHD. En el presente trabajo se investigó el polimorfismo c.733C/G en el gen RHCE utilizando una reacción de PCR-SSP. Para confirmar resultados positivos se utilizó una reacción de PCR-RFLP. Por electroforesis capilar se secuenció el exón 5 del gen RHCE. La reacción de PCR SSP 733G permitió identificar esta variante en 5 de las 102 muestras (4.90%) provenientes de Tucumán, en 1 de las 34 muestras (2.94%) provenientes del Hospital Garrahan. El 100% de las muestras analizadas de La Plata y de Jujuy posee el SNV c.733C en homocigosis. Estos resultados fueron confirmados con PCR-RFLP. Posteriormente, se secuenció el exón 5 del gen RHCE en las muestras portadoras del SNV c.733G. El análisis permitió detectar solo el polimorfismo c.733G en heterocigosis en las 6 muestras estudiadas. Considerando que la mutación c.733G en el gen RHCE es responsable de la expresión de los antígenos de baja incidencia V y VS, los resultados muestran una frecuencia mayor a la esperada para estos antígenos de baja incidencia. Los donantes portadores de este alelo podrían causar aloinmunización en receptores de sangre.