Modificación del uso de codones de lasecuencia codificantede antígenos de Toxoplasma gondii para su expresión en plantas

LAGUÍA BECHER, M. Y CLEMENTE, M.

Chascomús, Argentina

Congreso; XXVI Reunión de la Asociación Argentina de Fisiología Vegetal.; 2006

Asociación Argentina de Fisiología Vegetal

El uso de plantas transgénicas como biorreactores ha demostrado su potencialidad a partir de la obtención de diversas proteínas de interés como anticuerpos, antígenos y enzimas. Sin embargo, son necesarios mayores rendimientos para la producción a nivel comercial.                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                             La optimización del uso de codones del transgén para adecuarlo al de las plantas permite incrementar los niveles de producción de las proteínas recombinantes. En este trabajo, con el objeto de aumentar los niveles de expresión de los antígenos SAG1 y Gra4 de T. gondii  en plantas, se modificaron las secuencias codificantes para adecuarlos al uso de las plantas. Se diseñaron oligonucleótidos superpuestos y se amplificó por PCR a partir de las secuencias codificantes. Esto permitió introducir mutaciones silenciosas adecuando el contenido de GC al encontrado para Nicotiana tabacum (43.66%), eliminar codones de baja frecuencia y elementos reguladores que afectan la estabilidad del ARN mensajero tales como potenciales sitios de splicing, señales de poliadenilación y regiones con más de cinco bases G/C o A/T consecutivas. En total se introdujeron 80 mutaciones en la secuencia codificante de SAG1 y 68 mutaciones en la de Gra4. En el caso de SAG1, se eliminaron el péptido señal del extremo N-terminal y una región hidrofóbica de 14 aminoácidos del extremo C-terminal que es modificada postraduccionalmente en el parásito, ya que podrían desestabilizar a la proteína cuando se expresa en sistemas heterólogos. Por otro lado, ambos genes vegetalizados se fusionaron a péptidos transitos que permiten el envío al apoplasto o el anclaje al retículo endoplásmico con el objeto de evaluar el efecto de la compartimentalización subcelular en los niveles de expresión. Las diferentes versiones se clonaron entre el promotor CaMV 35S duplicado y el terminador T-nos. El casete de expresión se subclonó en el plásmido binario pZP200bar para futuras agroinfiltraciones por vacío en hojas de tabaco.