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Las plantas proveen un económico y conveniente sistema de producción a gran escala de numerosas proteínas recombinantes. Entre las ventajas que se pueden citar con respecto a otros sistemas de producción son: las practicidad, seguridad y los bajos costos de producción a gran escala. Las estrategias más comúnmente usadas para expresar genes foráneos en plantas se basa en la transformación estable y en la expresión transiente. La expresión transiente es particularmente útil para ensayar la funcionalidad y la estabilidad del producto de los transgenes antes de moverse hacia la producción de plantas transgénicas (Fischer et al. 1999). La Toxoplasmosis es causada por el parásito Toxoplasma gondii. Esta enfermedad tiene alto impacto en la medicina humana y veterinaria, ya que es causante de abortos en humanos y en animales domésticos (Luft y Remington 1992). De los antígenos de T. gondii estudiados hasta la fecha, las proteínas SAG1 y Gra4, demostraron ser las más protectivas en el modelo de ratón (Petersen et al. 1998). Además, una versión antigénica e inmunogénica de SAG1 fue exitosamente expresada en hojas de tabaco (Clemente et al. 2005). Estos resultados alientan la idea que otras proteínas del parásito podrían ser expresadas en plantas. Por tal motivo y como Gra4 también mostró altos valores protectivos en otros sistemas de expresión se propuso a esta proteína como candidata para la expresión en hojas de tabaco. En este trabajo nosotros expresamos y purificamos la proteína Gra4 de T. gondii a partir de hojas de tabaco. La construcción pApoHisx6Gra4 se obtuvo adicionando un peptido señal de apoplasto y una cola de 6 Histidinas al gen gra4 dirigido por un promotor constitutivo. Esta construcción se usó para innfiltrar hojas de la línea transgénica Nicotiana tabacum cv. Xanthi (line X-27-8), cedida por la Dra. Vance. Esta línea expresa altos niveles de la proteína P1/HC-Pro de Tobacco etch virus (TEV) que mostró supremir el silenciamiento inducido por un transgen (Chapman et al 1992). La expresión transiente de Gra4 en hojas de tabaco se evaluó mediante el análisis de Western blot que reveló una proteína que reacciona con el anticuerpo anti-Gra4. Posteriormente, las proteínas totales solubes extraídas de las hojas infiltradas con la construcción pApoHisx6Gra4 se pasaron por una columna de niquel para su purificación. El Western blot de la purificación reveló que la proteína pudo purificarse eficientemente. Es decir que la proteína Gra4 pudo expresarse y purificarse eficientemente en plantas, aunque deberán mejorarse los niveles de expresión. Una alternativa es el mejoramiento en el uso de codones. Futuros ensayos de inmunización en ratones deberán realizarse para confirmar su funcionalidad. Bibliografía: Fischer et al. (1999). Biotechnol 30:113-116., Luft y Remington (1992) Clin Infect Dis 15:211-222, Petersen et al. (1998) Vaccine 16:1283-1289, Clemente et al. (2005) Molecular Biotech. 30: 41-50, Kapila et al. (1997) Plant Sci 112:101-108, Chapman et al (1992) Plant J 2: 549-557. Las plantas proveen un económico y conveniente sistema de producción a gran escala de numerosas proteínas recombinantes. Entre las ventajas que se pueden citar con respecto a otros sistemas de producción son: las practicidad, seguridad y los bajos costos de producción a gran escala. Las estrategias más comúnmente usadas para expresar genes foráneos en plantas se basa en la transformación estable y en la expresión transiente. La expresión transiente es particularmente útil para ensayar la funcionalidad y la estabilidad del producto de los transgenes antes de moverse hacia la producción de plantas transgénicas (Fischer et al. 1999). La Toxoplasmosis es causada por el parásito Toxoplasma gondii. Esta enfermedad tiene alto impacto en la medicina humana y veterinaria, ya que es causante de abortos en humanos y en animales domésticos (Luft y Remington 1992). De los antígenos de T. gondii estudiados hasta la fecha, las proteínas SAG1 y Gra4, demostraron ser las más protectivas en el modelo de ratón (Petersen et al. 1998). Además, una versión antigénica e inmunogénica de SAG1 fue exitosamente expresada en hojas de tabaco (Clemente et al. 2005). Estos resultados alientan la idea que otras proteínas del parásito podrían ser expresadas en plantas. Por tal motivo y como Gra4 también mostró altos valores protectivos en otros sistemas de expresión se propuso a esta proteína como candidata para la expresión en hojas de tabaco. En este trabajo nosotros expresamos y purificamos la proteína Gra4 de T. gondii a partir de hojas de tabaco. La construcción pApoHisx6Gra4 se obtuvo adicionando un peptido señal de apoplasto y una cola de 6 Histidinas al gen gra4 dirigido por un promotor constitutivo. Esta construcción se usó para innfiltrar hojas de la línea transgénica Nicotiana tabacum cv. Xanthi (line X-27-8), cedida por la Dra. Vance. Esta línea expresa altos niveles de la proteína P1/HC-Pro de Tobacco etch virus (TEV) que mostró supremir el silenciamiento inducido por un transgen (Chapman et al 1992). La expresión transiente de Gra4 en hojas de tabaco se evaluó mediante el análisis de Western blot que reveló una proteína que reacciona con el anticuerpo anti-Gra4. Posteriormente, las proteínas totales solubes extraídas de las hojas infiltradas con la construcción pApoHisx6Gra4 se pasaron por una columna de niquel para su purificación. El Western blot de la purificación reveló que la proteína pudo purificarse eficientemente. Es decir que la proteína Gra4 pudo expresarse y purificarse eficientemente en plantas, aunque deberán mejorarse los niveles de expresión. Una alternativa es el mejoramiento en el uso de codones. Futuros ensayos de inmunización en ratones deberán realizarse para confirmar su funcionalidad. Bibliografía: Fischer et al. (1999). Biotechnol 30:113-116., Luft y Remington (1992) Clin Infect Dis 15:211-222, Petersen et al. (1998) Vaccine 16:1283-1289, Clemente et al. (2005) Molecular Biotech. 30: 41-50, Kapila et al. (1997) Plant Sci 112:101-108, Chapman et al (1992) Plant J 2: 549-557.

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