Relevamiento de características superficiales de Lactobacilos Benéficos Vaginales (LBV): producción de exopolisacáridos y formación de biofilm

JESSICA SILVA; ANTONELLA MARCHESI; MARIA ELENA FÁTIMA NADER

La Punta, San Luis

Congreso; I Reunion conjunta de RICIFA y SAFE; 2018

RICIFA y SAFE

Los Lactobacilos son predominantes en el microbioma vaginal sano y se incluyen en formulaciones vaginales para reconstituir microbioma y prevenir infecciones. Previamente se aislaron, caracterizaron y seleccionaron LVB por propiedades probioticas. La producción de exopolisacáridos (EPSs) es una propiedad importante en alimentos, y recientemente se evidenció su efecto inmunoestimulador. Asimismo, la formación de biofilm promovería la adhesión de LBV, y combinadas favorecerían su permanencia en mucosas. El objetivo de este trabajo es relevar la producción de EPS en LBV, optimizarla en diferentes medios, y completar los ensayos de formación de biofilm, para definir las condiciones de mayor producción para avanzar en el diseño de formulaciones vaginales.Se evaluaron 24 cepas de LBV de mujeres sanas de Tucumán, seleccionadas previamente. Se subcultivaron dos veces en MRS caldo, se inocularon al 2% en MRS caldo con diferentes carbohidratos: glucosa-2% (MRSg), sacarosa-4% (MRSs) y leche descremada-10% (MRSm) y se incubaron 14 horas a 37°C. Se transfirieron 5-6 gotas de caldo a iguales medios agarizados y se incubaron 72-96h a 37°C. Colonias de agar se observaron macroscópicamente y se seleccionaron las EPSs(+), por fenotipo mucoso/filante y su cuantificación. La formación de biofilm se evaluó en 10 LVB (microplacas de poliestireno), inoculándolas en LAPTg y MRS con y sin Tween 80 (1ml/L), y cuantificación con cristal violeta.De las 24 cepas de LBV, 9 producen EPSs: Lb.gasseri CRL1314, Lb.gasseri CRL1320, Lb.gasseri CRL1322, Lb.jensenii CRL1317, Lb.salivarius CRL1296, Lb.mucosae CRL1508, Lb.paracasei CRL1512, Lb.rhamnosus CRL1332 y Lb.rhamnosus CRL1511. MRS con glucosa como única fuente de carbono resultó óptimo para producción de EPS+ en la mayoría de casos. El biofilm+ se evidencio preferentemente en caldos sin tensioactivo. Lb.reuteri CRL1324, Lb.jensenii CRL1313, Lb.fermentum CRL1287, Lb.salivarius CRL1296 y Lb.salivarius CRL1328 producen mayor biofilm en MRS?T que en LAPTg-T.La producción de EPSs y formación de biofilm en LBV es cepa específica, y no se relaciona con la especie o grupo metabólico. La propiedad EPSs+ en medios con carbohidratos específicos y Biofilm+ en medios óptimos permite optimizar la producción de biomasa de LVB EPS+ y biofilm+ para incluirlas como promotores de adhesión y permanencia.