Citotoxicidad y caracterizacion de metabolitos secundarios obtenidos de Anagallis arvensis L

PASTORIZA, A.C.; SOBERÓN J.R.; SGARIGILA, M. A.

Tucumán, Argentina

Congreso; IV Reunión conjunta de sociedades de biología de la República Argentina; 2020

Asociación de Biología de Tucumán

Anagallis arvensis es usada popularmente como antifúngico, antiviral, cicatrizante, antiinflamatorio, sedante, expectorante y diurético. En trabajos previos validamos la actividad antifúngica del extracto etanólico sobre cepas de C. albicans y caracterizamos parcialmente los metabolitos bioactivos purificados. Los objetivos de éste trabajo fueron, optimizar la obtención de la fracción triterpénica completa, analizar la composición de metabolitos presentes en dicha fracción y evaluar la citotoxicidad. La fracción de interés se obtuvo por un método de precipitación con acetona, y se purificó por fraccionamiento en cromatografía en columna de Sílica gel, analizando perfiles de composición por CCF de silicagel revelada con p-anisaldehído sulfúrico. La fracción triterpénica purificada de A. arvensis (FTA) se analizó por cromatografía líquida de ultra alta presión acoplada a espectrometría de masas en tandem (UHPLC-EM/EM). La citotoxicidad de FTA se evaluó sobre cultivos de linfocitos humanos aislados de sangre periférica (LHBPs), cultivados en medio RPMI-1640 completo a 37°C, 5% CO2, en condiciones de activación o no, por lipopolisacárido (LPS). Se determinaron: actividad metabólica celular, midiendo la reducción del 3-(4,5.dimetiltiazolil-2) 2,5 ifenilbromuro de tetrazolio (MTT 2,5 mg . mL-1 ) en lector de ELISA a 550 nm; e integridad de membrana, por exclusión de azul de Tripán a través de conteo en cámara de Neubauer bajo microscopio óptico. Se ensayaron concentraciones entre 0 y 100 μg . mL-1 . Los ensayos se realizaron por duplicado y se analizaron estadísticamente aceptando un α=5%. FTA presentó itotoxicidad significativa a 100 μg . mL-1(menor al 75% de viabilidad). Sin embargo, a concentraciones menores de 50 μg . mL-1 , se alcanzó una viabilidad ≥ al 75%, comparable al control de viabilidad del modelo celular ensayado. El análisis por UHPLC-EM/EM permitió identificar 9 glicósidos triterpénicos, derivados del ácido oleanólico: Metilanagallosaponina I; Anagallisina A, B, C y D; Anagallosaponina II; Anagallosido A; Anagallosido A monometoxilado y 3 Beta-[2-O-beta-D-Glucopiranosil-4-O-[2-O-beta-D-xilopiranosil-3-O-(3-Obeta--glucopiranosil-beta-D-glucopiranosil)-beta-D-glucopiranosil]-alfa-L-arabinopiranosiloxi]-13,28-poxioleanano-16 alfa,30-diol; estos dos últimos se informan por primera vez para A. arvensis. Los resultados obtenidos demuestran que FTA podría ser una alternativa viable para uso medicinal; la información generada en este trabajo está siendo utilizada en estudios de actividad antiinflamatoria, abordados por nuestro grupo de investigación.