Análisis de la genotoxicidad de compuestos aislados de hojas de Tripodanthus acutifolius

SOBERÓN, J.R.; SGARIGLIA, M.A.; SAMPIETRO, D.A.; QUIROGA, E.N.; VATTUONE, M.A.

Tucumán (Argentina).

Congreso; XXV Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2008

Asociación de Biología de Tucumán

Introducción: la genotoxicidad es la toxicidad que se manifiesta en el material genético de las células, e incluye efectos tanto directos como indirectos sobre el ADN. Los extractos vegetales crudos constituyen una mezcla compleja de compuestos con significativas actividades biológicas (antibacteriana, antioxidante, antiinflamatoria, etc.), pero con posibles efectos genotóxicos. La purificación de compuestos bioactivos puede conducir a una disminución de la toxicidad genética. Objetivos: evaluar la actividad genotóxica de extractos obtenidos a partir de la infusión de Tripodanthus acutifolius (Ruiz & Pavón) Van Thiegem (Loranthaeae) y de los compuestos purificados mediante el "ensayo rec" con cepas de Bacillus subtilis. Materiales y métodos: se preparó una infusión a partir de hojas de T. acutifolius, acorde a Farmacopea Argentina VIa Ed. El extracto seco se extrajo con solventes de polaridad creciente (hexano, éter etílico, acetato de etilo, metanol). El extracto metanólico se fraccionó por cromatografía en columna (fase estacionaria: Sephadex LH-20, fase móvil: metanol), y los eluentes se agruparon en 10 fracciones (L1-L10) de acuerdo a sus composiciones (reveladas con reactivo de productos naturales y con vainillín/H2SO4). Las fracciones se purificaron por HPLC en fase reversa, generando 4-(3´,4´-dihidroxifenil)-2-p-Ó-R-glucofuranosilbutano (tripodanthúsido, a partir de L2), rutina y nicotiflorina (a partir de L4) e hiperósido e isoquercitrina (a partir de L8). Los compuestos se identificaron por técnicas espectroscópicas (UV-Vis, RNM mono y bidimensional y polarimetría) y cromatográficas (coinyección con estándares en HPLC, cromatografía en papel para los azúcares). La genotoxicidad se determinó mediante el ensayo rec que evalúa el crecimiento diferencial de cepas de 8. subtilis H17 y M45 como índice de genotoxicidad. En los pocilios de policubetas se incubaron (a 37°C) las suspensiones bacterianas con cantidades crecientes de las muestras a evaluar, hasta que las DO595nm de los controles de crecimiento alcanzaron 0,1. Se calculó el porcentaje de crecimiento (Crecimiento %) para cada pocilio, y se gráfico Crecimiento % en función de la concentración de muestra ensayada (para cada cepa bacteriana). Las curvas se linealizaron (transformación Probit), se calculó el área entre ambas curvas (S-probit, que representa la genotoxicidad) y los valores obtenidos se compararon con datos tabulados que indican el grado de genotoxicidad. Las pruebas se llevaron a cabo por triplicado para cada concentración de muestra y cada cepa. Se utilizaron K2Cr2O7 (referente genotóxico) y Kanamicina (referente no genotóxico). Resultados: la infusión de hojas de T. acutifolius y el extracto metanólico presentaron fuerte genotoxicidad mediante el ensayo rec (S-Probit: 0,8 y 0,6 respectivamente). La fracción L2 presentó menor genotoxicidad (S-Probit: 0,3). Los compuestos purificados no presentaron genotoxicidad al ser analizados individualmente (los valores de S-Probit fueron inferiores a 0,2). Conclusiones: los extractos crudos o parcialmente purificados pueden presentar toxicidades étíftivas o sínérgicas entre sus constituyentes. La purificación de las sustancias que los componen permite por un lado comprender la naturaleza de los efectos biológicos y por otro lado disminuir la toxicidad.