Efecto de diferentes fluidos lácteos y medios de cultivo sobre la formación de biofilms de Staphylococcus aureus productor de mastitis bovina.

CÁCERES ME,; GIACOMODONATO M, ; BUZZOLA F

Jornada; X JORNADAS DE JÓVENES INVESTIGADORES; 2021

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires.

La mastitis bovina es una enfermedad del ganado lechero que provoca alteraciones en la calidad y composición de la leche. Staphylococcus aureus es uno de los patógenos más importantes que producen mastitis clínica, subclínica y crónica. Distintos factores de virulencia y de adherencia que se pueden expresar o no según las condiciones del entorno que rodean a S. aureus están involucrados en la formación de biofilms. Estas estructuras contribuyen a la cronicidad de la infección. Este estudio tuvo como objetivos: caracterizar la naturaleza de la matriz extracelular de los biofilms, evaluar la actividad proteolítica y el efecto de diferentes medios de cultivo y de fluidos propios de la industria lechera sobre la formación de biofilms de S. aureus. Se estudió la formación de biofilm en 8 cepas de S. aureus aisladas de mastitis subclínica y dos cepas de referencia en los medios de cultivo caldo tripteína de soja (TSB), TSB suplementado con 0.25% de glucosa (TSBg) o carentes de iones hierro por tratamiento con Chelex-100 (CTSBg), leche y suero lácteo. La cuantificación de los biofilms crecidos por 24 h a 37oC se determinó por tinción con cristal violeta y lectura espectrofotométrica. La producción de PIA se cuantificó por ELISA. La presencia de proteínas o ADN extracelular en la matriz de los biofilms se determinó por tratamiento con proteinasa K o con ADNasa I durante 2 h a 37°C. Después de cada tratamiento, los biofilms se fijaron, tiñeron y cuantificaron. La actividad proteolítica se estableció por medición del halo de degradación de la caseína utilizando placas de agar skim-milk.Todas las cepas formaron biofilms en TSB, TSBg y leche. La leche favoreció la producción de biofilms en algunas cepas que formaron más biomasa en este medio que en TSBg, a la vez que 3 cepas resultaron no formadoras de biofilm en este medio. Tanto el medio CTSBg como el suero lácteo inhibieron significativamente la formación de biofilms en la mayoría de las cepas. La producción del polisacárido PIA varió entre 0,435-3,58 y no se observaron diferencias significativas entre las cepas (p=0.81, t-test). Los valores de proteínas presentes en la matriz variaron entre 0,058-2,97 y se encontraron mayores niveles en las cepas fuerte formadoras de biofilm (p=0.0034, χ2-test). La presencia de ADN extracelular varió entre 0,074-2,77 y se encontraron valores más altos en aquellas cepas fuerte formadoras de biofilm. Siete cepas presentaron actividad proteolítica evidenciada por los halos de degradación que oscilaron entre 15-20 mm de diámetro. Las 3 cepas restantes no mostraron proteólisis y además no formaron biofilm en leche (p=0.0011, t-test). Estos resultados aportan información acerca del comportamiento de S. aureus frente a distintas condiciones del medio que lo rodea y las características de los biofilms que forma. La leche y la capacidad proteolítica son factores importantes que facilitarían su persistencia en la ubre y el ambiente lácteo.