Efecto de TGFβ1, de distintos sueros y de vectores lentivirales sobre la expresión de citoquinas estimulantes de la hematopoyesis, en celulas madre mesenquimales humanas derivadas de tejido adiposo

RODRIGUEZ, TM; CARREA, A; SALDIAS, A; IRIGO, M; GALLO, R; PERONE, MJ; DEWEY, RA

Congreso; LVI Reunion Anual de SAIC; 2011

Las células madre hematopoyéticas (HSCs) poseen un gran potencial terapéutico, aunque su cultivo ex vivo requiere de citoquinas que favorezcan su proliferación. Una de las estrategias para expandir HSCs se basa en el cocultivo de éstas con células madre mesenquimales provenientes del tejido adiposo (ASC). Estas, secretan citoquinas hematopoyéticas (CH) que contribuyen a la multiplicación de las HSCs. Se sabe que TGFβ1, secretado por la mayoría de las células, inhibe la multiplicación de HSC mediante la disminución de factores de crecimiento hematopoyético. Aquí estudiamos en ASCs el efecto de distintos sueros, tales como suero humano (HS), suero bovino fetal (FBS) y seroalbúmina bovina (BSA), en presencia de TGFß1, sobre la expresión de un panel de CH formado por TPO, SCF, Flt3-ligand (FL), IL-6, IL-3, G-CSF, LIF y GM-CSF, mediante PCR cuantitativa. Por último, analizamos el efecto de la modificación genética con vectores lentivirales, sobre el mismo panel de CH, en presencia y ausencia de TGFß1. Para ello, utilizando un vector lentiviral que codifica para la proteína GFP, se transdujeron ASCs. De esta manera pudimos documentar que los patrones de expresión de las citoquinas en estudio varían significativamente en presencia de los distintos sueros (p<0.01), siendo BSA la mejor condición encontrada. Además en ASC, TGFβ1 modula la expresión de varias de las CH analizadas (p<0.01), mientras que la expresión de otras parece no ser alterada. Por último observamos que, la modificación genética de ASCs con vectores lentivirales, altera significativamente (p<0.01) los niveles de expresión de los genes analizados. En conclusión, pudimos establecer el efecto de TGFß1 sobre la expresión de CH en ASCs, y que la modificación genética con vectores lentivirales altera los patrones de secreción de citoquinas de modo no deseado. El estudio de los factores solubles y de las células presentes en el microambiente permitirá desarrollar sistemas más efectivos de expansión de HSC.