Determinación de la estabilidad a temperatura y ph fisiológico de enzimas fibrinolíticas secretadas por Agaricomicetes nativos de Misiones

ACOSTA GABRIELA ALEJANDRA; SVIERCZ FRANCO AGUSTÍN; MIÑO MARÍA LAURA; BENITEZ SILVANA FLORENCIA; FONSECA MARÍA ISABEL; FARIÑA JULIA INÉS; ZAPATA PEDRO DARIO

Ciudad de Buenos Aires

Simposio; V Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos; 2019

Asociación civil de microbiología general

Las enfermedades cardiovasculares se han convertido en una de las principalescausas de muerte a nivel mundial. El mal funcionamiento del sistema plasminógeno/plasmina, encargado de disolver los coágulos de sangre, genera la acumulación de fibrina que puede llevar a trombosis, causando enfermedades cardiovasculares. Se han reportado diversos organismos capaces de producir enzimas fibrinolíticas con potencial aplicación en terapia trombolítica. Nuestro equipo de trabajo identificó 3 cepas de Agaricomicetes nativos de Misiones con capacidad de secretar enzimas fibrinolíticas, siendo el objetivo del presente trabajo determinar la estabilidad en función del tiempo, a temperatura y pH fisiológico, de las enzimas fibrinolíticas secretadas por dichas cepas.Para determinar la estabilidad enzimática en función del tiempo, a pH 7,4 y 37 °C, de los sobrenadantes obtenidos del cultivo en medio líquido de Perenniporia martius LBM 224, Schizophyllum commune LBM 026 y Schizophyllum commune LBM 223, se activaron las cepas en medio sólido conteniendo (en g/L): extracto de malta, 12,7 y agar, 17, durante 5 días a 28 °C. A partir de las placas activas se cortó un taco de 7 mm Ø cubierto de micelio joven de cada cepa y se inoculó en 20 mL de medio líquido conteniendo (en g/L): glucosa, 35; peptona de soja, 5; extracto de carne, 5; NaCl, 2; KH2PO4, 0,5 y MgSO4?7H2O, 0,5. Los cultivos se incubaron a 28 °C durante 7 días para S. commune LBM 026 y S. commune LBM 223, y 14 díaspara P. martius LBM 224. El sobrenadante de cultivo se separó del micelio por centrifugación a 6.000 x g durante 10 min. Se tomaron alícuotas de 500 μL de sobrenadante a las cuales se adicionaron 500 μL de buffer Tris-HCl 50 mM pH 7,4, se incubaron a 37 °C durante 5 días y se midió la actividad enzimática residualperiódicamente entre las 24 y 168 h. La actividad fibrinolítica se reveló mediante el método de placas de fibrina de Astrup & Mullertz (1952). A las 24 h de incubación, la actividad fibrinolítica del sobrenadante de P. martius LBM 224 mostró un incremento del 13% con respecto al tiempo cero de incubación, manteniendo el 50% de actividad a las 48 h,y el 16% a las 120 h. Para sobrenadantes de S. commune LBM 026 y S. commune LBM 223 se observó unaestabilidad de la actividad fibrinolítica del 70% a las 24 h, manteniendo el 50% de dicha actividad hasta las 120 h para S. commune LBM 223 y hasta las 72 h para S. commune LBM 026. A las 168 h de incubación, los sobrenadantes de S. commune LBM 223 y LBM 026 presentaron una actividad del 27 y 16%, respectivamente,mientras que P. martius LBM 224 no presentó actividad. La cepa con mayor estabilidad de la actividad fibrinolítica fue S. commune LBM 223, motivo porel cual ha sido seleccionada para continuar estudiando su potencial como productora de enzimas fibrinolíticas.