PARTICIPACIÓN DEL OXIDO NÍTRICO EN LA MODULACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA NITRATO REDUCTASA DE TRIGO

ELIANA ROSALES; MARIA F. IANONNE; MARIA D. GROPPA; MARIA P. BENAVIDES

Congreso; XXVIII Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2010

El oxido nítrico (NO) es una molécula gaseosa que regula distintas funciones en las plantas. Su origen es aun discutido, ya que la óxido nítrico sintasa (NOs) identificada en mamíferos  aún no ha sido aislada en plantas. La otra fuente enzimática propuesta es la nitrato reductasa (NR), la cual cataliza la reducción del NO3- a NO2- y de éste a NO, actividad ésta menos clara y conocida. El siguiente trabajo tiene como objetivo demostrar la regulación ejercida por el NO sobre la NR y establecer un posible mecanismo de acción. Se usaron como modelo segmentos de hojas de trigo de plantas de 12 d, que se incubaron en las siguientes soluciones: SNP 10, 100 y 500 µM, durante 3, 6, 9, 21 h. (en presencia y ausencia de c-PTIO 100 y 200 µM para SNP 10 µM, a las 6 h de incubación); GSNO 10, 100 y 500 µM y KCN 0,5 µM, a las 3 y 21 hs. El SNP produjo una caída en la actividad de la NR, dependiente de la concentración y el tiempo. El GSNO, dador de NO de cinética diferente al SNP, produjo una caída en la actividad de NR a las 3 h, pero a las 21 h la actividad se recuperó y aún aumentó con SNP 500 µM; el KCN, inhibidor de la NR, produjo una disminución del 25% de la actividad, a 3 y 2h. El c-PTIO, atrapante de NO, revirtió parcialmente el efecto del NO. El contenido de la proteína evaluado por Western Blot no se modificó para SNP 100 µM a las 3 y 21 hs, lo que indicaría que el mecanismo es post-traduccional. No se observaron cambios en la nitración de los residuos de Tir de la NR sobre una fracción purificada de la enzima, para los tratamientos con SNP 10 y 100 µM a las 3 y 21h, observándose un aumento en el contenido de nitratos a las 16 y 21 h. Los resultados hasta aquí obtenidos permiten establecer la existencia de una modulación negativa por parte del NO sobre la NR, lo cual se debería a una  modificación post-traduccional aún no identificada. Esta disminución de la actividad de la enzima impacta sobre el metabolismo del N, a través del aumento en el contenido de NO3-, que podría deberse a la caída en la actividad de la enzima como también a la oxidación del NO.