Purificación de toxoide tetánico utilizando ligandos peptídicos inmovilizados en matrices cromatográficas

MARÍA C. MARTÍNEZ CERON; LUCÍA ÁVILA; SILVANA L. GIUDICESSI; MATÍAS FINGERMANN; FERNANDO ALBERICIO; SILVIA A. CAMPERI; OSVALDO CASCONE

CABA

Congreso; IV Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos 2016; 2016

El toxoide del tétanos se utiliza para la producción de vacunas para prevenir el tétanos, una enfermedad causada por la toxina tetánica. Los protocolos de producción de la vacuna consisten en tratar el sobrenadante de cultivo de Clostridium tetani productor de toxina tetánica con formaldehido y luego se realiza una purificación parcial del mismo a través de precipitación con sales y ultrafiltración. La presencia de contaminantes en la vacuna estaría relacionada con reacciones adversas a la misma. Es por eso que es necesario diseñar un proceso de purificación de bajo costo. En este trabajo se utilizaron bibliotecas combinatorias peptídicas sintéticas y se realizó un doble screening para la selección de péptidos con afinidad por el toxoide. Una vez analizadas las secuencias obtenidas, el péptido fue inmovilizado en matrices cromatográficas. En las condiciones ensayadas el 96% del toxoide puro se unió a la misma y presentó una Kd de 1,25 x 10-8 M, determinada por isoterma de adsorción. Cuando se ensayó con el sobrenadante de cultivo el 100 % de la proteína fue recuperada con una pureza moderada. Próximamente se identificarán las proteínas acompañantes con el objetivo de determinar si son formas truncadas del toxoide y/o de la toxina.