Control de calidad de péptidos antimicrobianos por ESI MS para el tratamiento de hongos multirresistentes intrahospitalarios

GIUDICESSI, SILVANA L; VITALE, ROXANA G; CAMPERI, SILVIA A

San luis

Congreso; IV Congreso Argentino de Espectrometría de Masa; 2022

SAEM

Los péptidos han adquirido importancia en su función como agentes antimicrobianos dado el acelerado incremento de la resistencia a fungicidas. Se han detectado casos de hongos con resistencia a fármacos comúnmente utilizados y el surgimiento de nuevas cepas, lo que hace necesario el desarrollo de antifúngicos más eficientes. Por otro lado, el grado de pureza es un factor clave en el desarrollo de los nuevos antifúngicos, debido a que muchos de éstos deben ser administrados por vía oral o intravenosa. En este trabajo se sinterizaron tres AMP (TB, MP Y CHN) y se realizó por ESI MS el control de calidad de los mismos para ser probados como potenciales agentes antifúngicos contra cepas clínicas del género Candida, obtenidos a partir de muestras de pacientes hospitalizados.Los AMP se sintetizaron empleando la química Fmoc en resina Rink-Amide-metilbenzhidrilamina (MBHA). El control de calidad de los péptidos se realizó en el CEQUIBIEM, FCEyN, UBA, analizando por RP-HPLC acopado a un ESI MS (Thermo Scientific, modelo Q-Exactive) de manera de identificar cada péptido por MS y MS/MS. Los espectros MS y MS/MS obtenidos fueron analizados con el programa Proteome Discoverer. Se tomaron colonias crecidas en medio Saboureaud y se prepararó un inóculo 1 Mc Farland. Se prepararon placas de Petri con medio Mueller Hinton y se sembró el inóculo con cada cepa a ensayar, haciendo orificios con sacabocado en el que se inocularon 15 µl de las distintas concentraciones de cada péptido. Se incubaron las placas por 24-48 horas a 37°C.En los espectros de masa se observaron los iones mono y policargados de los tres péptidos con una alta pureza y resolución. El control de calidad se completó con el análisis por MS/MS en la que se observaron las series b e y de cada AMP. Una vez confirmada la pureza de cada AMP, se procedió al estudio de inhibición. Los tres péptidos presentaron actividad antifúngica contra la especie C. tropicalis, de la cual no se encontraron registros previos en bibliografía, además de presentar halos de inhibición para C. glabrata en el estudio con el péptido TB. Los péptidos TB, MP Y CHN demostraron ser una alternativa interesante en la búsqueda de una nueva clase de antifúngicos, ya que los péptidos cortos presentan varias ventajas respecto a los antifúngicos comerciales.