Análisis del patrón de metilación del promotor de tejido no hematopoyético de la fosfotirosina fosfatasa SHP-1(PTPN6).

CARIAGA-MARTINEZ AE; CUBILLA MA; LORENZATI MA; RODRÍGUEZ DI; ZAPATA PD

Foz do Iguazzu

Congreso; 52º Congresso Brasileiro de Genética; 2006

SBG

El patrón de metilación de algunas regiones promotoras puede influir en la expresión génica, activándola o reprimiéndola. Este patrón podría verse alterado durante la carcinogénesis. Los procesos de fosforilación–desfosforilación regulan el funcionamiento de la célula. Recientemente, se ha descrito un bucle autocrino antiproliferativo en células tumorales prostáticas que involucra la fosfotirosina fosfatasa SHP-1 (PTPN6) y los receptores para somatostatina sstr2 y sstr5. Se ha demostrado, además la disminución en la expresión de SHP-1 conforme avanza el grado de diferenciación del tumor, lo cual podría deverse a un cambio en el patrón de metilación de alguno de sus promotores. La SHP-1 consta de dos promotores de actividad diferencial de acuerdo al linaje celular. El promotor 1 actúa exclusivamente en la regulación génica de la proteína en células no hematopoyéticas. El objetivo de este trabajo fue diseñar una PCR-metilación específica (MSP) que evalúe el estado de las islas CpG en el promotor de tejido no hematopoyético del gen shp1 (PTPN6) para poder utilizarlo como herramienta en la evaluación de las causas que afecta a la expresión de la proteína durante la carcinogénesis. El paso crucial en el desarrollo fue el diseño bioinformático realizado sobre la secuencia del promotor 1 del gen PTPN6 que se extiende desde el nucleótido 1 al 986 (GenBank AH003242). En éste trabajo se evaluó la región que va del nucleótido 901 al 1144, generándose 3 cebadores que hibriden en el DNA modificado con bisulfito de sodio siguiendo las recomendaciones de Hermann y cols., 1996. La combinación de ellos, permite la obtención de un amplicón común de 133 pb y otro 246 pb que define el estado de metilación de esta región del promotor. Se trabajó con muestras provenientes de cortes de próstata y mama embebidos en parafina, utilizándose una adaptación de la técnica descripta por Nascimento y cols., 2003. Además, se utilizó DNA de mucosa yugal y sangre extraído aplicando una modificación de la técnica descripta por Miller y cols, 1986. El DNA fue modificado por tratamiento con bisulfito de sodio, lo que provoca la desaminación de las C no metiladas, generando U, mientras que las C metiladas serán resistentes al tratamiento, razón por la cual podemos diferenciarlas variando la secuencia de los cebadores. Al aplicar la técnica al DNA de próstata, mama, mucosa yugal y sangre no se observaron cambios en los patrones de metilación por lo que podría tratarse de una zona constantemente metilada dentro del promotor.