Estandarización de métodos de extracción de DNA para la amplificación de marcadores STR en Pinus taeda

FONSECA MI, TORO AA, WALANTUS HL, ZAPATA PD

Posadas

Jornada; II Jornadas Nacionales De Estudiantes De Biología – 1-3 de junio 2007; 2007

JONEBI

Introducción: Uno de los pilares económicos de Misiones es la forestoindustria, contándose actualmente con 330.000 ha de plantaciones forestales, en su mayoría pinos y araucarias. Sin embargo, no se ha alcanzado el nivel de desarrollo biotecnológico que conjugue calidad genética con características fenotípicas de excelencia en especies maderables de la Provincia. Los STR informan la variabilidad en la población de estudio analizándose su posible asociación con rasgos fenotípicos deseables que favorezcan su uso forestal. Los STR son secuencias de 2-6 pb repetidas en tándem usualmente en extensiones de hasta 100 pb, distribuidos por el genoma y flanqueadas por secuencias altamente conservadas. Su variabilidad se debe al cambio del número en unidades de repetición, analizándosela fácilmente por PCR usando cebadores específicos de secuencias únicas que flanquean los STRs. La identificación y caracterización molecular de la diversidad genética de plantas involucran la evaluación de numerosos individuos necesitándose métodos rápidos y precisos de extracción de DNA. Las hojas de las coníferas contienen polifenoles, ácidos y resinas que comprometen la extracción del DNA e inhiben la acción de la Taq polimerasa. Objetivos: Evaluar diferentes métodos de extracción de DNA, a partir de Pinus taeda y determinar los parámetros que permiten obtener cantidad y calidad adecuada de DNA para caracterizar a nivel molecular diferentes poblaciones de la provincia utilizando STRs. Materiales y Métodos: El protocolo de extracción se basó en la utilización del bromuro de cetiltrimetilamonio, aplicándose diferentes modificaciones. Las diferencias observadas estuvieron en la composición del tampón de extracción y en la purificación del DNA. Resultados y conclusiones parciales: Se obtuvieron bandas de DNA genómico en cantidad y calidad adecuada ser amplificado. La utilización de los cebadores RIPPTs 1, 31, 65, 77 y 79 (BV683040, BV683043, BV683047, BV683052, BV683053) con DNA extraído de acículas durante la amplificación permitieron la obtención de bandas que corresponden a los tamaños (pb) esperados, 263, 175, 261, 142 y 153 respectivamente. Nuestros resultados indican que el método de extracción de DNA utilizado es eficiente para el análisis de STRs en estudios poblacionales de Pinus taeda.