Optimización de una PCR para la amplificación de la región promotora 1 del gen shp-1 luego de su tratamiento con bisulfito

GIORGIO EM, BJ CHANETON, PD ZAPATA

REVISTA DE CIENCIA Y TECNOLOGIA

FCEQyN - CIDET

Lugar: Posadas; Año: 2009 vol. 12 p. 4 - 8

1851-7587

Las alteraciones en los patrones de metilación de algunos genes pueden contribuir al desarrollo del cáncer. Existen evidencias de cambios en los niveles de expresión de SHP-1 en próstata tumoral, siendo fundamental evaluar el estado de metilación de sus promotores. La secuenciación bisulfito es la técnica de elección para establecer el patrón de metilación. El objetivo de este trabajo fue estandarizar las condiciones para la amplificación del Promotor 1 para el gen shp-1 luego del tratamiento con bisulfito. Se trabajó con 2 tejidos de expresión diferencial para SHP-1: mucosa yugal y tejido sanguíneo. A partir de cebadores que hibridan en sitios libres de islas CpG del promotor 1 del gen shp-1 tratado con bisulfito de sodio se analizaron distintas combinaciones de los componentes de PCR aplicándose distintas estrategias de ciclado. Un esquema de ciclado con 3 bloques de temperatura de hibridación decreciente permitió la obtención del amplicón de 500pb coincidente con el esperado para el fragmento del promotor analizado.