Cambios en el contenido de N-Acetil-Gluucosamina asociados a la quimiotaxis en espermatozoides porcinos

BUTTAZZONI, A; ALVAREZ P; DIANA, A; SOSA MA; VIERA, LA; AGUILERA AC

Mendoza

Conferencia; XXVI Jornadas de investigación ?Avances y desafíos de la ciencia en pandemia; 2020

UNCuyo

En los mamíferos, los espermatozoides (SPZ) entran en contacto con diferentes ambientes moleculares en los cuales se selecciona progresivamente la subpoblación que posea la mejor capacidad fecundante y las mejores características para apoyar el desarrollo embrionario. Mediante diversos mecanismos de orientación, incluida la quimiotaxis, sólo un pequeño número de SPZ alcanzan las inmediaciones del ovocito. Los fluidos del tracto genital femenino, tales como el fluido folícular (FF), el fluido oviductal (OF) y la secreción del complejo cúmulus-ovocito (COC), podrían promover la quimiotaxis de los SPZ al sitio de fecundación. La progesterona (P4) se considera el quimioatrayente con mayor eficacia en la mayoría de las especies de mamíferos, sin embargo otros componentes de los fluidos podrían atraer SPZ de manera aún más eficiente. En el presente estudio, evaluamos posibles cambios en la composición de carbohidratos de la superficie de los SPZ después de la capacitación y quimiotaxis utilizando diferentes quimioatrayentes. Para esto, determinamos el contenido de N-acetil-glucosamina (NAG) en SPZ eyaculados porcinos después de los procesos mencionados mediante citometría de flujo usando la lectina WGA-FITC. Observamos que el contenido de NAG fue significativamente mayor en SPZ capacitados (30 min en medio de capacitación TALP, a 38.5ºC y con 5% de CO2) en comparación con los SPZ eyaculados o almacenados en BTS (medio diluyente). Para los ensayos de quimiotaxis, recogimos fluido oviductal y folicular de hembras pre-púberes (FF0 y OF0) y hembras en fase periovulatoria (FF2 y OF2) y se midieron los niveles de glicosidasas. Para los ensayos de quimiotaxis, se llenaron seis pocillos de la cámara de quimiotaxis con SPZ frescos (20x106/mL) de cerdos fértiles los cuales fueron pre-incubados con 2,5% de los fluidos FF0, OF0, FF y OF2. Los pocillos opuestos de la cámara de quimiotaxis se llenaron con TALP (grupo de control) o TALP suplementado con progesterona (P4) (28,3 pM). Después de 20 minutos a 38.5ºC y 5% de CO2, se rescataron las SPZ de los pocillos opuestos, se procesaron para la detección de NAG y se analizaron por citometría de flujo. Pudimos observar que el contenido de NAG se modifica en los SPZ preincubados con fluidos FF2 y OF2. Estos resultados preliminares sugieren que los fluidos de la fase periovulatoria pueden modificar la membrana de los SPZ y esto incide en las poblaciones separadas por quimiotaxis.