Nueva metodología para la determinación de metaloproteínas en suero lácteo humano mediante SEC-ICP-MS

ACOSTA, MARIANO; TORRES, SABIER; GIL, RAÚL ANDRES; MARTINEZ, LUIS DANTE

Río IV

Congreso; 9° Congreso Argentino de Química Analítica; 2017

Universidad Nacional de Río IV y Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Introducción: Numerosos estudios han demostrado que la lactancia materna ofrece muchos beneficios para bebés, niños y madres [1]. La tendencia actual sobrepasa la determinación de elementos trazas en muestras de leche humana, focalizándose en la identificación de diferentes metaloproteínas, desde una perspectiva metaloproteómica. En este sentido, las técnicas separativas nativas (N-PAGE y SEC) acopladas a ICP-MS proporcionan información valiosa. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un método nuevo que permita la separación y determinación simultáneas de metales esenciales (Mn, Co, Cu y Se) unidos a fracciones proteicas de suero lácteo humano (SLH) obtenido de muestras de leche humana mediante SEC-ICP-MS.Resultados: Se utilizó un cromatógrafo Perkin-Elmer Series 200, una columna TSK gel G3000SW, y buffer TRIS-HCl de pH = 6,8 como fase móvil. La determinación de los metales esenciales (55Mn, 59Co, 63Cu, 82Se) y el monitoreo de la elusión de las fracciones proteicas (32S16O) fue realizado con un ICP-MS Perkin-Elmer Elan DRC-e. Los cromatogramas de las muestras analizadas mostraron dos fracciones (Figura 1).Ambas fracciones (68,878 y 240,776 KDa, respectivamente) mostraron niveles detectables de Mn, Co, Cu y Se. En condiciones óptimas, los límites de detección (LOD) y de cuantificación (LOQ) fueron: Mn (2,81 y 8,51 μg L-1); Co (3,39 y 10,27 μg L-1); Cu (1,46 y 4,43 μg L-1); Se (5,86 y 17,75 μg L-1), respectivamente.Conclusiones: Nuestro estudio ha demostrado la presencia de Mn, Co, Cu y Se ligado a las fracciones proteicas de SLH en la lactancia avanzada (más de 12 meses). De esta manera, las condiciones nativas utilizadas durante la separación permitieron alcanzar una selectividad y sensibilidad adecuadas para la determinación de metaloproteínas en una matriz compleja.Referencias: [1] B. Liu, and D.S. Newburg, Human milk glycoproteins protect infants against human pathogens, Breastfeed Med. 8 (2013) 354-362.