Aislamiento y pruebas de patogenicidad de hongos aislados de hoja de yerba mate

LOPEZ ANA CLARA; CHELALICHE ANIBAL SEBASTIAN; ALVAREGNA ADRIANA ELIZABET; VILLALBA LAURA LIDIA; ZAPATA DARIO PEDRO

2018-01-01/2023-06-01

Biológica

Sanidad vegetal-Plagas

1. LUGAR DE REALIZACIÓNLaboratorio de Biotecnología Molecular (BiotecMol) ? Instituto de Biotecnología Misiones?Dra. Maria Ebe Reca? (InBioMis) ? FCEQyN ? Univ. Nacional de Misiones. Ruta 12 km 7 ½.Campus Universitario. Localidad: Posadas. Código Postal: 3300 Provincia: Misiones.Teléfono/Fax: 0376-4483125 (interno 279) ? e-mail: biotecmol2010@gmail.com2. OBJETIVOAislar y evaluar la patogenicidad de hongos provenientes de lesiones de hojas de plantinesyerba mate del vivero de la Fundacion Alberto Roth.3. RESPONSABLES TÉCNICOSDra. Ana Clara López. InBioMis, FCEQyN, UNaM. CONICETLic. Anibal Sebastián Chelaliche. InBioMis, FCEQyN, UNaM. CONICETDra. Adriana Elizabet Alvarenga. InBioMis, FCEQyN, UNaM. CONICETDra. Laura Lidia Villalba. InBioMis, FCEQyN, UNaM.Dr. Pedro Darío Zapata. InBioMis, FCEQyN, UNaM. CONICET4. MATERIAL DE ANÁLISISSe seleccionaron 10 plantas de yerba mate de un año de vida que presentaban signos y/osíntomas visibles de alguna patología en sus hojas. Las plantas se encontraban en el vivero dela Fundación Alberto Roth, Santo Pipó, Misiones, Argentina, de las cuales se recolectaron 13hojas con signos y/o síntomas de enfermedad.5. METODOLOGÍAAislamiento de microorganismos fúngicosLas hojas se cortaron en pequeñas porciones con signos y/o síntomas de infección y tejidosano, se tomaron 5 porciones por hoja y se realizó un protocolo de sanitización de un lavadocon alcohol 70 % y 3 lavados con agua destilada estéril.Para el aislamiento de los microorganismos fúngicos, se utilizó el protocolo sugerido porAgrios (2005) (Figura 2) en el cual pequeñas porciones de hoja desinfectadas se colocaron enplacas de Petri con medio agar-agua al 2 % p/v (con 50 mg/ml de cloranfenicol para evitar eldesarrollo de colonias bacterianas) y se incubaron a 28 °C, hasta la visualización de coloniasfúngicas. Se evaluó diariamente el crecimiento de colonias en las placas, cuando se observó lapresencia de micelio desarrollado, se seleccionaron colonias con diferentes característicasmacroscópicas, las cuales fueron repicadas en agar-agua al 2 % p/v y se incubaron a 28 °Chasta desarrollo de la coloniaEnsayos de patogenicidad in vitroSe utilizaron 32 tratamientos, incluido el control, de tres repeticiones cada uno, y la variablede estudio fue el daño ocasionado por el microorganismo mediante el cálculo del índice deseveridad.Para la inoculación de las hojas, se siguió el protocolo descripto por Imathiu et al. (2009),con modificaciones. En la Figura 3, se muestra el protocolo de desinfección de las hojas y laspartes que constituyen la cámara húmeda.Dentro de la bandeja plástica, a las hojas se les realizó un pequeño corte con un bisturíestéril a ambos lados del nervio principal, se colocó un disco de PDA con micelio desarrolladode los aislamientos fúngicos y se tapó la bandeja, obteniendo la cámara húmeda. Como controlnegativo, se utilizaron hojas desinfectadas sin el agregado de disco con micelio. Las cámarashúmedas se incubaron a 28 °C durante 14 días en presencia de luz. Luego, en aquellas hojasque presentaron signos/síntomas, se midió el área de la lesión utilizando el programa Image J(Schneider et al., 2012). Con estas mediciones se calculó el índice de severidad empleando lasiguiente fórmula:Superficie del halo de crecimiento x 100(Superficie foliar total/2)Índice de severidad (%) :Aquellos aislamientos que presentaron un índice de severidad mayor al 5 % se consideraronpatógenos de hoja de yerba mate.