Purificación y Caracterización Parcial de un Inhibidor de Proteasa Proveniente del Mesocarpio y Endocarpio de Solanum melongena

JESSICA GUTIERREZ GONZALEZ; JOSÉ S. CISNEROS; MARIANA TELLECHEA; WALTER D. OBREGÓN

Rosario

Congreso; XIV simposio latinoamericano de farmacobotánica, I congreso latinoamericano de plantas medicinales y: XI Simposio argentino,; 2013

Los inhibidores de proteasas (IPs) son moléculascardinales que en los últimos tiempos están siendoutilizadas en el diseño de diversos fármacos parainactivar proteasas blanco involucradas en procesospatológicos e inhibir otras que son esenciales enel ciclo de vida de organismos invasores que causaninfecciones y enfermedades. En el reino vegetalson escasos los estudios referidos a IPs de naturalezapeptídica. Solo se han informado en las familiasSolanaceae, Graminaceae y Leguminaceae. Dentrode la familia Solanaceae los más estudiados pertenecena la especie tuberosum, mientras que noexisten importantes informes sobre melongena, a lacual se le han atribuido en Asia y en algunas comunidadesindígenas de América del Sur y el Caribe,propiedades medicinales frente a enfermedades delhígado, dolores crónicos en las articulaciones, abscesose inflamaciones de los ganglios inguinales,entre otras. Por esto se pretende aislar inhibidoresde proteasas de manera específica del mesocarpo yendocarpo del fruto de Solanum melongena. Se obtuvoun extracto por el procesamiento de 0,975 kgdel fruto sin cáscara y en presencia de 2 L de bufferde Acetato de Sodio 0,1 M, EDTA 5 mM, PVP 1 % P/V, cisteína 10 mM, pH 5,5 con posterior filtrado ycentrifugado. Así se obtuvo una preparación enriquecidaen proteínas la cual denominamos extractocrudo (EC). Se determinó la actividad inhibitoriadel EC frente a proteasas de distintos tiposmecanísticos (serinproteasa, metalocarboxipeptidasas,cisteinproteasas). Se realizaron cromatografíasde afinidad empleando matrices que conteníanpapaína, carboxipeptidasa A (CPA) y tripsinainmovilizadas en geles de glioxilagarosa, respectivamente.Se determinó la actividad inhibitoria delas fracciones eluidas frente a cada enzima, y seencontró apreciable actividad inhibitoria solo en elcaso de tripsina. La fracción aislada fue caracterizadamediante electroforesis SDS-PAGE y se obtuvouna única banda de un peso molecular de 15 kDa.Finalmente se procedió a realizar una curva dosisrespuestadonde se determinó que la concentraciónde inhibidor que disminuye la actividad enzimáticaa un 50 % de la actividad inicial (i0.5), es de 1,1 μgde proteína/ml de medio de reacción. Proponemosen siguientes investigaciones determinar la potencialactividad biológica de esta fracción inhibidorade tripsina.