Caracterización molecular de eventos de trigo genéticamente modificados a través de Secuenciación de Nueva Generación.

GARIBOTTO MB; MUÑOZ M; BEZNEC A; CARIGNANO HA; PUEBLA A; BOSSIO E

Congreso; XLVIII Congreso Argentina de Genética; 2020

En la actualidad, la caracterización molecular de las inserciones en eventos transgénicos suele realizarse por Southern Blot o a través de secuenciación de genoma. Ambas técnicas resultan dificultosas al analizar grandes poblaciones de una especie con genoma complejo, como es el trigo pan. Para intentar simplificar este proceso, en este trabajo se plantea poner a punto una técnica de Enriquecimiento de una secuencia blanco, seguido de Secuenciación de Nueva Generación, con el fin de identificar las secuencias flanqueantes a las inserciones en eventos transgénicos de trigo pan.La técnica implementada utiliza sondas biotiniladas preparadas a partir de un vector de transformación específico. Estas sondas se utilizaron para la captura y enriquecimiento de las regiones de interés de una biblioteca ADN genómico que fue preparada utilizando un genotipo transgénico de trigo. La biblioteca enriquecida fue secuenciada por secuenciación masiva.Mediante el análisis de las secuencias apareadas obtenidas, altamente enriquecidas en secuencias de interés, se busca encontrar pares discordantes, ?junction sequences? y/o la combinación de ambas condiciones.Actualmente se encontraron diferentes combinaciones de inserciones en los cromosomas analizados.En este trabajo se plantea obtener información detallada tanto a nivel molecular como a nivel de secuencia, para el screening y selección de eventos transgénicos. Este análisis proveerá información sobre las zonas flanqueantes para el diseño de oligos específicos, el número de inserciones y su ubicación dentro del genoma.