AISLAMIENTO Y CARACTERIZACION DE MUTANTES TEMPERATURA SENSIBLES DE MYCOBACTERIUM SMEGMATIS DEFICIENTES EN LA SINTESIS DE ACIDOS MICOLICOS

JUAM MANUEL BELARDINELLI ; HUGO CARIGNANO; AGUSTINA DE LA IGLESIA ; HECTOR MORBIDONI

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiología General; 2007

Asociación Argentina de Microbiología

Los ácidos micólicos, ácidos grasos de cadena larga de hasta 90 átomos de carbono, son componentes esenciales de la envoltura celular micobacteriana, involucrados en virulencia y responsables de la baja permeabilidad mostrada por estos microorganismos. Basados en esto, realizamos una búsqueda de mutantes que presentaran al mismo tiempo un fenotipo temperatura sensible (demostrando esencialidad) y una mayor permeabilidad a drogas lipofílicas (sugiriendo alteración de la envoltura celular) en un cultivo mutagenizado químicamente de la micobacteria saprófita M. smegmatis,. De 18 mutantes termo-sensibles aisladas (sobre un total de 10,000 chequeadas), 5 mostraron alteraciones morfológicas, una susceptibilidad incrementada a las drogas lipofílicas Rifampicina, Cristal Violeta y novobiocina, además de una drástica reducción del crecimiento en medio líquido a 42ºC. La cepa parental mc2 155 de M. smegmatis utilizada en este trabajo sintetiza 3 familias de ácidos micólicos: α-, α´-(ácidos micólicos no oxigenados) y epoxi- (ácidos micólicos oxigenados). El análisis de la biosíntesis de ácidos micólicos de las mutantes a 42ºC mostró los siguientes fenotipos: 1) la pérdida de los ácidos epoxi-micólicos solos o acompañados de la pérdida de la síntesis de ácido oleico; 2) pérdida de la síntesis de ácidos α - y epoxi- micólicos; 3) la pérdida de los ácidos no oxigenados α´. La sensibilidad a drogas aumentó muy ligeramente al perderse los ácidos epoxi-micólicos (fracción minoritaria del total) pero fue significativamente mayor al perderse la síntesis de los ácidos α - micólicos. Estos resultados sugieren que los ácidos micólicos tienen un rol fundamental sobre la arquitectura de la envoltura celular micobacteriana, incrementando la susceptibilidad a drogas aún cuando solo una de las familias es alterada. La identificación de los genes afectados en estas mutantes permitirá dilucidar nuevas etapas en la biosíntesis de las distintas familias de ácidos micólicos, mientras que sus productos aportarían nuevos blancos para el desarrollo de drogas antimicobacterianas.