Inducción in vitro de callos de naranjo dulce a partir de segmentos internodales y tejido nucelar para su utilización en ensayos de edición génica.

MUSSO FEDERICO OMAR; FERREYRA CORDERO LUCRECIA; GIMENEZ PAULA D.; GOCHEZ ALBERTO M.

Simposio; "Biotecnología para un mundo en cambio" XIV SIMPOSIO REDBIO ARGENTINA; 2023

Argentina es líder en la producción de frutas frescas para consumo interno y exportación.Uno de los principales factores limitantes para la producción de cítricos son lasenfermedades, siendo el Huanglongbing (HLB) la más destructiva a nivel mundial. Estaenfermedad está asociada a las bacterias Candidatus Liberibacter species y estransmitida a través del insecto Diaphorina citri. Los patógenos activan genes desusceptibilidad en las plantas para establecer una interacción compatible y causarsíntomas. La tecnología CRISPR/Cas9 permite la edición de genes endógenos y puede seraplicada a genes de susceptibilidad a HLB, para generar plantas resistentes o tolerantesa la enfermedad. Existen dos estrategias principales para la transformación genética conCRISPR/Cas9: la introducción estable de los genes de este sistema en el genoma de laplanta huésped o la expresión transitoria de sus componentes a través deribonucleoproteínas preensambladas, lo que permite generar plantas editadas sintransgenes. En ambos casos, es necesario optimizar el cultivo de explantos de cítricospara su posterior transformación y regeneración de plantas. En este trabajo se indujeroncultivos in vitro de callos de Citrus sinensis a partir de 2 tipos de explantos: segmentosinternodales de plantines de la variedad “Pineapple” y tejido nucelar de semillas defrutos inmaduros de la variedad “Valencia late”. Varetas de plantines de invernadero deaproximadamente un año se desinfectaron para luego cortar segmentos internodalesque se cultivaron en medio sólido Murashige & Skoog (MS) con las hormonas ácidonaftalenacético (ANA) y bencilaminopurina (BAP), en oscuridad hasta que sedesarrollaron los callos. Se desprendieron las masas de callos formados en los extremosy se subcultivaron en el mismo medio, de manera de establecer líneas individuales delas que se observó morfología, color y cinética de crecimiento. Se iniciaronposteriormente cultivos de callos en medio líquido y se extrajeron alícuotas paraobservar las células en suspensión al microscopio, donde se pudieron registrar lascaracterísticas morfológicas típicas. Para la extracción de nucelas, se esterilizó lasuperficie de frutos de campo verdes inmaduros de 12 a 14 semanas de la variedadValencia late y se extrajeron las semillas de las cuales se retiró el tejido nucelar,eliminando los embriones zigóticos. Dicho tejido se cultivó en medio solido MS conextracto de malta y las hormonas ANA y BAP, en oscuridad hasta la aparición de callos.Callos seleccionados se disgregaron y subcultivaron en medio líquido. Se observótambién la regeneración de embriones que posteriormente originaron brotes y raíces apartir de tejido nuclear cultivado con un fotoperiodo de 16/8 horas. Al presente secuenta entonces con líneas de callos derivados de estos dos tipos de explantos que seránutilizados para la transformación estable y/o transitoria con los componentes necesariospara la edición genética de genes de susceptibilidad a HLB.