Distribución de especies de peces en Tierra del Fuego mediante ADN ambiental: validación de oligonucleótidos

VEYÑ MARIANELA; NARDI CRISTINA FERNANDA; CHALDE TOMÁS

Chascomús, Buenos Aires, Argentina

Congreso; VII Simposio Argentino de Ictiología; 2022

La técnica de ADN ambiental (ADNa) es un método no invasivo que se basa en la detección de fragmentos de ADN en muestras tomadas a partir del ambiente. Para detectar especies acuáticas, se obtiene el ADNa por filtración de agua y luego se amplifican fragmentos por PCR utilizando oligonucleótidos especie-específicos. Nuestro objetivo fue desarrollar un protocolo basado en ADNa para determinar presencia y distribución de las especies de peces que habitan ríos y estuarios de Tierra del Fuego. Para esto, se validaron oligonucleótidos especie-específicos a través de tres pasos: in sílico, in vitro e in situ. La validación in situ implica la detección de posible amplificación cruzada con especies presentes en el mismo ambiente utilizando herramientas bioinformáticas. Luego, se ensayó la especificidad enfrentando cada par de oligonucleótidos al conjunto de ADN genómico de todas las especies factibles de encontrar en los puntos de muestreo, para confirmar la ausencia de amplificación cruzada a través de PCR (in vitro). Por último, se analizó la eficiencia de los oligonucleótidos para amplificar muestras ambientales provenientes de sitios en donde la presencia de cada especie es conocida (in situ). Como resultado, se lograron validar 5 pares de oligonucleótidos a través de los tres pasos mencionados, los cuales detectan presencia de Galaxias maculatus, G. platei, Eleginops maclovinus, Geotria macrostoma y Oncorhynchus mykiss. Este trabajo nos permitirá profundizar en el conocimiento de la distribución de especies nativas y exóticas, al complementar su uso con técnicas tradicionales de muestreo en sitios cuya aplicación puede ser limitada.