DESARROLLO DE UN ELISA IN-HOUSE PARA LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS CONTRA EL VIRUS DE VARICELA-ZÓSTER

SACUR, J; MATIAS BRANCHER, J; ARCE, L; MARTINEZ, A; VIZOSO-PINTO, MG

Congreso; XIII CONGRESO ARGENTINO DE VIROLOGÍA 2021; 2021

Introducción: La varicela es una enfermedad febril eruptiva cau-sada por la primoinfección con el virus de varicela zóster (VVZ). En Argentina se registran ~100.000 casos anuales, aunque se estima que serían 400.000 porque no es de notificación obligatoria. Los test serológicos para IgG específica permiten determinar el estadoinmune de personas con historial incierto o negativo de varicela y para candidatos a recibir vacunación o inmunoglobulina hiperin-mune.Objetivos: Clonar, expresar y purificar la proteína ORF68 de VVZpara desarrollar un ELISA in-house para IgG anti-VVZ.Metodología: Clonamos ORF68 del VVZ en el vector de expresión pETG-N-RGS-His[rfB], expresamos la proteína en E. coli y la purificamos mediante cromatografía de afinidad. Con este antígeno desarrollamos un ELISA indirecto para detectar IgG en suero con el método de tablero de damas. Probamos distintas concentraciones de antígeno y diluciones de sueros caracterizados, gelatina,albúmina o leche como agentes bloqueantes, concentraciones de Ac 2rio y de 3,3?,5,5′tetrametilbencidina (TMB). Con este prototipo determinamos la IgG en 78 sueros de 2018. Determinamos el punto de corte como el promedio de las absorbancias de suerosnegativos +/- 4 DS.Resultados: ORF68 se expresó en E. coli y se purificó en condiciones nativas y desnaturalizantes. Las condiciones óptimas para el ensayo fueron: 1μg/ml del antígeno, 1/80 de suero, 1/1500 deanticuerpo 2rio y 1mg/ml de TMB en el revelador. De 78 sueros analizados, 77 fueron positivos. Una seroprevalencia de 98.7% concuerda con estudios en otros países antes de incorporar la va-cuna.Conclusiones: Desarrollamos un test serológico para IgG contra el VVZ. Se requiere un mayor número de muestras negativas para realizar curvas ROC y poder determinar la sensibilidad y especificidad del ensayo. Este ELISA podría usarse como herramienta de vigilancia en la era post-vacuna, y para identificar personas susceptibles que requieran vacunación pasiva o activa.