EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD INMUNOGÉNICA DE UNA VACUNA NOVEL DE TIPO DIVA CONTRA LA NEOSPOROSIS EN BOVINOS

MENDOZA MORALES LUISA FERNANDA; SANCHEZ E; LAGORIO V; CORIGLIANO M; RAMOS DUARTE A; CLEMENTE M; SANDER V

La Plata

Jornada; XII Jornadas y Reunión Anual de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2019

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

Neospora caninum es el agente etiológico de laneosporosis, una enfermedad infecciosa mundialmentereconocida como la principal causa de abortos y fallasreproductivas en bovinos. Actualmente no existentratamientos quimioterapéuticos ni vacunas contra laneosporosis. Un abordaje novedoso es el de las vacunas?DIVA? (del inglés differentiate infected from vaccinatedanimals). En un trabajo previo de nuestro laboratoriodemostramos en un modelo murino de neosporosis congénitaque la inmunización de ratones BALB/c con una formulaciónvacunal recombinante novel tipo DIVA, conteniendo el Agde superficie SAG1 de N. caninum (rNcSAG1) y la proteínade choque térmico de 90 kDa de Arabidopsis thaliana(rAtHsp81.2) como adyuvante, generó no sólo IgG antirNcSAG1sino también IgG anti-rAtHsp81.2, y otorgóprotección parcial contra la infección y la transmisión verticaldel patógeno. Teniendo en cuenta estos antecedentes,nos propusimos determinar la capacidad inmunogénicay propiedad DIVA de la formulación vacunal propuesta enla especie de interés, Bos taurus. Con este propósito, 21vaquillonas libres de neosporosis fueron divididas en 6grupos, a los que se les administró, según correspondiera, 2dosis de cada una de las siguientes formulaciones medianteuna inyección subcutánea los 0 y 30 días post inmunización(d.p.i.): (A): 50 μg de rNcSAG1 + 150 μg rAtHsp81.2 (n=4);(B): 200 μg de rNcSAG1 + 600 μg rAtHsp81.2 (n=4); (C):500 μg de rNcSAG1 + 1500 μg rAtHsp81.2 (n=4);. (D): 150μg rAtHsp81.2 (n=3); (E): 1500 μg de rAtHsp81.2 (n=3);(F): control vehículo (sólo 3 ml de PBS; n=3). Se colectaronmuestras de sangre (40 ml) de la vena yugular para evaluarla respuesta inmune humoral a los 0 (pre-inmune), 30 (preboost),45, 60 y 90 d.p.i. Se recuperó el suero, que fueutilizado para realizar la determinación del título de IgGanti-rNcSAG1 y anti-rAtHsp81.2 y los isotipos IgG1 e IgG2anti-rNcSAG1. Por otro lado, con el objetivo de evaluar larespuesta celular se colectó sangre con heparina a los 60d.p.i. de todos los animales, a partir de la que se obtuvieronlas células mononucleares de sangre periférica (CMSP), quefueron cultivadas en medio DMEM en presencia/ausenciadel Ag. (rNcSAG1) por 72 h. Posteriormente se recuperaronlos sobrenadantes del cultivo celular para la determinaciónde secreción de IFN-γ por Elisa. Los sueros de los animalesque recibieron las dosis media (grupo B) y alta (grupoC) de la formulación vacunal mostraron altos títulos deanticuerpos IgG e IgG2 anti-rNcSAG1 desde los 30 d.p.i. enadelante, alcanzando valores máximos a los 60 d.p.i. Losanimales que recibieron la menor dosis de la formulaciónvacunal (A) y aquellos correspondientes a los controles dedosis de adyuvante (D y E) o vehículo (F) no mostraronanticuerpos anti-rNcSAG1. No fue posible detectar títulosde IgG1 anti-rNcSAG1 en ninguna de las muestras. Porotro lado, todos los animales a los que se les administróel adyuvante solo (D y E) o en conjunto con el Ag. (A, B yC) mostraron títulos de IgG anti-rAtHsp81.2, obteniéndoselos mayores valores a los 60 d.p.i. para los grupos querecibieron la mayor dosis de adyuvante (C y E). Respectode la respuesta inmune celular, la estimulación con el Ag.de las CMSP provenientes de los animales inmunizadoscon la mayor dosis de la formulación vacunal (C) indujo lasecreción de niveles de IFN-γ significativamente mayores alos del grupo vehículo (F). En conclusión, la inmunizaciónde vaquillonas con la dosis más alta de la formulaciónvacunal de tipo DIVA conteniendo el Ag. rNcSAG1 y comoadyuvante la proteína rAtHsp81.2 es capaz de generar unaimportante respuesta inmune humoral con la secreción deIgG e IgG2 anti- rNcSAG1 e IgG anti-rAtHsp81.2, así comotambién de promover la respuesta inmune celular, mediadapor la producción de IFN-γ. Estos resultados nos alientan aevaluar su capacidad inmunoprotectora durante la preñezbovina.