CONSTRUCCIÓN DE UN SISTEMA REPORTERO DE LA VÍA DE SEÑALIZACIÓN Wnt

DE BOECK MAXIMILIANO; VALDECANTOS, PA

Jornada; XX Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores Augusto Palavecino; 2019

Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia - UNT

Introducción: Las proteínas Wnt y la vía de señalización Wnt-β-catenina forman parte del conjunto de proteínas deseñalización celular que participan en el mantenimiento de laintegridad del epitelio del oviducto. La proteína β-catenina tieneun papel central en la transducción de la señal intracelular Wnt,funcionando tanto como activador de la transcripción y comoparte de las uniones adherentes en las células epiteliales.Objetivos: Puesto que la activación de la vía canónica de Wntdesencadena una respuesta celular a través de la acumulaciónnuclear de β-catenina, el objetivo de este trabajo fue construirun sistema reportero basado en la proteína quimérica β-catenina de Bos taurus fusionada a la proteína fluorescenteverde EGFP.Materiales y métodos: A partir de ARN total de célulasepiteliales del oviducto bovino cultivadas in vitro, se sintetizóADNc utilizando cebador oligo dT y la enzima M-MLV. Sediseñaron cebadores específicos conteniendo sitios de cortepara la enzima de restricción NheI.Resultados: Con los cebadores diseñados se amplificómediante RT-PCR un producto de ADNc de 2.363 pb quecontiene el marco de lectura de la β-catenina de Bos taurus. Elproducto amplificado fue digerido con NheI para clonarlo en elvector pEGFP-C2, corriente arriba y en fase con el gen EGFP,que contiene un promotor del virus CMV. La construcción seutilizará para transformar la cepa Top10 de E. coli.Conclusiones: El sistema propuesto será una herramientamolecular con interesantes aplicaciones para el estudio in vitrode las vías de señalización que conducen a la activación de lavía Wnt canónica en el tracto reproductor de bovinos en tiemporeal y en células individuales cultivadas in vitro mediante laevaluación de la localización subcelular de β-catenina-EGFP.