La vía NOTCH es requerida para la protección contra el estrés por calor de las células madre espermatogoniales

MORENO ACOSTA OMAR DAVID; BOAN AGUSTÍN FERNANDO; HATTORI RICARDO; FERNANDINO JUAN IGNACIO

Buenos Aires

Jornada; XX Jornadas Anuales Multidisciplinarias; 2018

Sociedad Argentina de Biología

El estrés provoca la degeneración y desaparición de las células germinales en los testículos de los mamíferos y también en los peces, produciendo machos estériles en condiciones extremas. Se sabe que bajo estrés térmico, las células madre espermatogoniales (SSC), el tipo de célula crucial para la producción de gametas masculinos, permanece inactivo para protegerse de la apoptosis. Además, Notch es una vía bien estudiada como regulador de la proliferación y diferenciación celular; sin embargo, la participación del proceso molecular en la protección inducida por el estrés de la SSC no está bien dilucidada. En el presente trabajo investigamos el papel de psen2, una proteína de señalizacion del complejo gamma-secretasa que transdujo la vía NOTCH, en la protección de las SSC inducidas por el calor. Para aclarar esta protección inducida por el estrés, se criaron dos grupos de 10 machos adultos de peces medaka Oryzias latipes a 33 ° C (grupo de temperatura cálida, HT) y 26 ° C (grupo de control, NT) hasta 30 días. A los 0, 3, 10 y 30 días, se tomaron muestras de 5 individuos por grupo para la disección de los testículos. Después de 3 días de tratamiento térmico, la abundancia de transcripción (RT-qPCR) de p53 (pro-apoptótica) aumento en HT. Además, el número de células apoptóticas (ensayo TUNEL positivo) aumentó a HT a partir de los 10 días de tratamiento, mostrando células espermatogénicas muertas.Además, se analizó la vía Notch, mostrando que psen2, el receptor de Notch (notch1), los ligandos (jag1a, jag1b, jag2a, jag2b y dll4) y hes-1 (señalización Notch objetivo aguas abajo) estaban aumentados en HT luego de 10 días de tratamiento. Además, la localización de psen2 se caracterizó (anticuerpo anti-psen2) por inmunofluorescencia, presentando una expresión ubicua en los testículos expuestos a NT, pero restringiéndose alrededor de las SSC, hacia el final de los túbulos esperamtogénicos, en HT. Finalmente, la inhibición de la vía de señalización de Notch se analizó en el grupo HT en un experimento ex vivo con DAPT (inhibidor de la secretasa gamma) durante 24 horas. El número de SSC (células positivas para oct-4) analizadas por RT-qPCR e hibridación in situ disminuyó en los testículos HT expuestos con DAPT (12.5 y 25 nM), pero no en el tratamiento con NT, lo que demuestra que la vía Notch es crucial para la quiescencia de las SSC, y luego, para su supervivencia. Tomados en conjunto, estos resultados revelaron por primera vez la participación de la vía Notch en la protección de los SSC frente al estrés térmico