Aislamiento y caracterización de fagos líticos contra Enterococcus sp. formadores de biofilm

BLANCO, HÉCTOR; SACUR, JACINTO; VIZOSO PINTO MARIA GUADALUPE; JAY CLARK; MEI LIU

Congreso; XXI Congreso Argentino de Virologia; 2021

Sociedad Argentina de Virología

Introducción: Enterococcus faecalis y E. faecium causan diversas infecciones: urinarias, endocarditis, celulitis, heridas crónicas y bacteriemia. Son un gran problema en el ambiente intrahospitalario debido a la multirresistencia a antibióticos. La bacterioterapia ofrece una alternativa prometedora a los antibióticos. Por ello, nuestros objetivos fueron aislar, caracterizar y evaluar el potencial de disrupción de biofilm de bacteriófagos líticos para Enterococcus sp. aislados de aguas cloacales.Materiales y métodos: Las muestras se tomaron de la planta de tratamiento de efluentes de College Station, Texas; se filtraron y enriquecieron en cepas de Enterococcus sp. en medio BHI. Los fagos se purificaron a partir de placas de lisis en agar de doble capa. Se realizó microscopía electrónica de transmisión y aislamiento del ADN genómico mediante un kit de Promega. Se secuenciaron los genomas y se anotaron utilizando CPT Galaxy y CPT Apollo. La formación de biofilm de las cepas de enterococos, la inhibición de la formación y disrupción por los bacteriófagos aislados se evaluó a distintas multiplicidades de infección con la técnica de tinción con cristal violeta, mientras que para la penetración del biofilm se determinaron las UFP/ml de los fagos que atravesaron el biofilm formado sobre membranas. Se evaluó la estabilidad a distintas temperaturas y pH.Resultados: Aislamos 4 Siphofagos: dos Etquatrovirus, y dos Saphexavirus. Los extremos terminales son de tipo Cos5. El fago Saphiro tuvo la mayor amplitud de huéspedes infectando a 3 cepas de E. faecalis y a 3 de E. faecium de un total de 20 cepas de referencia y aislados clínicos de heridas blandas. Los fagos Saphiro y Salamanca fueron estables y capaces de inhibir la formación, de disrumpir y de penetrar el biofilm de las cepas testeadas.Conclusiones: Los nuevos fagos tienen potencial para su uso en la formulación de cócteles para tratar infecciones mixtas por E. faecalis y E. faecium formadores de biofilm.