Caracterización funcional de una metionina sulfóxido reductasa híbrida de Trypanosoma cruzi

GONZÁLEZ, LIHUE N.; BIROCCO, FRANCO; GUERRERO, SERGIO A.; IGLESIAS, ALBERTO A.; ARIAS, DIEGO G.

Congreso; XXXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2020

La metionina es un aminoácido susceptible a oxidarse a metionina sulfóxido (MetSO). Lareducción de MetSO a metionina está catalizada por la enzima metionina sulfóxidoreductasa (MSR), presente en casi todos los organismos. Trypanosoma cruzi, el agenteetiológico de la enfermedad de Chagas, es auxótrofo en metionina. A través de un análisisde su genoma, identificamos una secuencia codificante para la metionina sulfóxidoreductasa libre (fMSR), una proteína solo presente en organismos unicelulares. En T. cruzi,esta proteína está constituida por un dominio de tipo GAF fusionado al dominio TIP41(homólogo a TIP41 de levadura el cual está involucrado en la regulación negativa de la víaTOR en la levadura). La secuencia codificante del dominio GAF se expresó en Escherichiacoli y la proteína recombinante correspondiente se purificó y caracterizó funcionalmente. Laproteína recombinante exhibió actividad MSR con el isómero L-Met(R)SO y triparredoxinasy tiorredoxina de T. cruzi como sustratos reductores. Por otro lado, se realizó un ensayo decomplementación de levaduras utilizando una mutante Δtip41. Los resultados mostraronque TcfMSR (tanto el dominio TIP41 aislado como la proteína completa) podría compensarel fenotipo sensible a la rapamicina. Este resultado indica que la TcfMSR es activa,actuando negativamente en la vía TOR de levadura. Se realizó un ensayo de doble hibridoen levaduras con el dominio TIP41 y la proteína TAP42 (un posible interactor de TIP41 en T.cruzi), observándose interacción de estas proteínas. Se evaluó también el efecto defármacos inhibidores de la vía TOR (rapamicina y AZD8055) sobre el crecimiento deepimastigotes de T. cruzi. Se observó que ambos compuestos generan una disminución enel crecimiento del parásito. Estos resultados sugieren que la TcfMSR es un posible vínculoentre el metabolismo redox y la vía TOR en T. cruzi.